Bcl-2抑制劑(Gossypol acetic acid)公司正在出售的產(chǎn)品：Anti-Phospho-c-Kit (Tyr719) /FITC 熒光素標(biāo)記磷酸化原癌基因c-kit抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml
Rabbit Anti-horse IgG 兔抗馬IgG (親和層析純化)Multi-class antibodies規(guī)格： 1mg
葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)

以下是細(xì)胞生物學(xué)試劑的詳細(xì)介紹：

商品介紹：

公司產(chǎn)品僅用于科研細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程：

一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：

1）準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO)，90%,；優(yōu)質(zhì)胎牛血清,，10%,。

2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%,；二氧化碳,，5%。 溫度：37℃,，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%,。

3）凍存液：90%血清，10%DMSO,，現(xiàn)用現(xiàn)配,，液氮儲存。

二．細(xì)胞處理：

1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍,，移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻,。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液,，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻,。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度,。

2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

對于懸浮細(xì)胞,，傳代可參考以下方法：

方法一：收集細(xì)胞,，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘,，棄去上清液,，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中,。

操作步驟：

1. 樣品染色

1) 將Binding Buffer（10×）稀釋成1×Binding buffer工作液備用（1ml Binding Buffer（10×）需加入9ml無菌去離子水）,。

2) 對于懸浮細(xì)胞，500-1000g離心5min收集細(xì)胞,。

對于貼壁細(xì)胞,，要用不含EDTA的胰酶消化細(xì)胞，胰酶消化時間不宜過長或過短,，最好是在輕輕吹打可以使貼壁細(xì)胞吹打下來時,，加入細(xì)胞培養(yǎng)液，將細(xì)胞輕輕吹打下來,，轉(zhuǎn)移到離心管內(nèi),，500-1000g離心5min收集細(xì)胞。

3) 收集細(xì)胞后,，加入預(yù)冷PBS溶液輕搖或用移液器輕柔吹打洗滌,，離心收集細(xì)胞,，共洗滌兩次。

4) 在細(xì)胞沉淀中加入1×Binding buffer工作液,，重懸細(xì)胞,，使細(xì)胞濃度達(dá)到1×106 cell/ml。

5) 吸取100μl細(xì)胞懸液（細(xì)胞總數(shù)為1×105 cell）至一新管中,，加入5μl Annexin V-FITC和5-10 μl PI,，輕輕混勻，室溫避光孵育15min,。

2. 樣品檢測

1) 流式細(xì)胞儀檢測：

染色孵育后,，每管加入400μl 1×Binding Buffer工作液，混勻后使用流式細(xì)胞儀檢測（1小時內(nèi)檢測）,。

建議設(shè)置經(jīng)凋亡誘導(dǎo)的正常細(xì)胞,、PI單染和Annexin V-FITC單染3個對照組，正常細(xì)胞組可作為熒光補(bǔ)償調(diào)節(jié)去除光譜重疊和設(shè)定十字門的位置,。結(jié)果可用CellQuest等軟件進(jìn)行分析,，繪制雙色散點圖（two-color dot plot），F(xiàn)ITC為橫坐標(biāo),，PI為縱坐標(biāo),。Annexin V-FITC和PI聯(lián)合使用時，活細(xì)胞僅有很低強(qiáng)度的背景熒光,，早期凋亡細(xì)胞僅有較強(qiáng)的綠色熒光,，晚期凋亡細(xì)胞有綠色和紅色雙重?zé)晒狻?/span>

2) 熒光顯微鏡檢測：

染色孵育后涂片，顯微鏡下觀察,。使用熒光顯微鏡上的藍(lán)光和綠光通道分別觀察FITC和PI,。被Annexin V-FITC結(jié)合的細(xì)胞顯示漿膜上有綠色光環(huán)。喪失細(xì)胞膜完整性的細(xì)胞,，細(xì)胞核顯示紅色,，膜上有綠色光環(huán)。
短雙歧桿菌Pseudomonas synxantha

變幻青霉（可訂）Pseudomonas putida

尖孢鐮孢Delftia acidovorans

大單孢屬Pseudomonas putida

白腐盾殼霉（葡萄白腐病菌）Achromobacter xylosoxidans

水犧黃桿菌Pseudomonas putida

ChryseobacteriumPseudomonas fluorescens

費(fèi)比恩塞伯林德納氏酵母Burkholderia gladioli

中慢生華癸根瘤菌Acinetobacter lwoffii

珊瑚色小雙孢菌Pseudomonas alcaligenes

枯草芽孢桿菌Pseudomonas putida

紅色蠟?zāi)?/span>Pseudomonas corrugata

肉齒菌屬Pseudomonas fluorescens

大腸桿菌Burkholderia gladioli

微小桿菌Pseudomonas straminea

盤長孢狀盤孢Ralstonia pickettii

鏈霉菌Streptomyces│sp. 質(zhì)量規(guī)格：含量測定

乙嗜熱厭氧菌Thermoanaerobacter│ethanlicus 質(zhì)量規(guī)格：UV法溶出度檢查

多主葡萄殼菌Botryosphaeria│berengeriana De Not. 質(zhì)量規(guī)格：UV法含量測定
Bcl-2抑制劑(Gossypol acetic acid)SNF1LK2 英文名稱： 絲酸/蘇酸蛋白激酶SIK2抗體 0.2ml

phospho-EGFR (Tyr869) 英文名稱： 磷酸化表皮生長因子受體抗體 0.1ml

雞卵白蛋白/卵清蛋白抗體 Anti-OVA 0.1ml

Anti-Socs 2/FITC 熒光素標(biāo)記細(xì)胞因子信號傳導(dǎo)抑制蛋白2抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml

Rhesus antibody Rh Phospho-NMDAR1(Ser897) 磷酸化谷氨酸受體1抗體 規(guī)格 0.1ml

CREB-1 (cAMP responsive element binding protein-1) 環(huán)腺苷酸應(yīng)答元件結(jié)合蛋白(抗原)Multi-class antibodies規(guī)格： 0.5mg