公司產(chǎn)品僅用于科研
細(xì)胞生物學(xué)研究有以下幾個(gè)方面:
細(xì)胞生物學(xué)的研究?jī)?nèi)容十分廣泛,主要包括:
①細(xì)胞核,、染色體以及基因表達(dá)的研究;
②生物膜與細(xì)胞器的研究,;
③細(xì)胞骨架體系的研究,;
④細(xì)胞增殖及其調(diào)控;
⑤細(xì)胞分化及其調(diào)控,;
⑥細(xì)胞的衰老與編程性死亡(凋亡),;
⑦細(xì)胞的起源與進(jìn)化;
⑧細(xì)胞工程.
產(chǎn)品屬性:
中文名稱:AGC kinase抑制劑(AT13148)
英文名稱:AT13148
產(chǎn)品規(guī)格:1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg|100mg
發(fā)貨周期:1~3天
商品介紹:
AT13148是一種可,,ATP競(jìng)爭(zhēng)性的AGC kinase的抑制劑,,能夠抑制Akt1/Akt2/Akt3,p70S6K,,PKA和ROCKI/ROCKII的活性,,IC50值分別為38nM/402nM/50nM,8nM,,3nM和6nM/4nM,。 注:本品僅可用于科研實(shí)驗(yàn),嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途,! CAS號(hào):1056901-62-2 純度:99.46% 分子量:313.78 儲(chǔ)存條件:-20℃,,有效期2年,溶入溶劑后-20℃請(qǐng)盡量在一個(gè)月內(nèi)使用。 |
實(shí)驗(yàn)報(bào)告:
一,、分離與培養(yǎng):
1,、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,,然后用PBS將此組織塊清洗2次,,最后將1mm3左右大小,;
2,、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,,置37℃條件下消化10min,,之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液,自然沉淀并收集上清,,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置,;
3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,,混懸10s,,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,,重復(fù)此步驟2-3次,,直至組織*被消化;
4,、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液,,1200r/min 離心10min,棄去上清,,沉淀細(xì)胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng);
5,、差速貼壁1h后,,吸出培養(yǎng)基,按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng),;
二,、免疫熒光鑒定:
1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí),,棄去培養(yǎng)基,,用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min,;
2,、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,,然后在4℃條件下,,用0.1%Triton X-100透膜15min;
3,、PBS沖洗細(xì)胞2次,,每次10min,然后在室溫條件下,,用4% BSA封閉細(xì)胞30min,;
4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗,,然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜,;
5、PBS沖洗細(xì)胞3次,,每次10min,,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h,;
6,、用PBS沖洗3次,每次10min,,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照,。
操作規(guī)程
1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔,,通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升2000個(gè)細(xì)胞,,細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升5000~10000個(gè)細(xì)胞(具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目,需根據(jù)細(xì)胞的大小,,細(xì)胞增殖速度的快慢等決定),。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí).
2、.加入適當(dāng)濃度的0~10μL 受試化合物,。
3,、將96孔板在37℃,含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時(shí)間,。
4,、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。
5,、每孔加50μL 1× MTT 溶液,,在37℃孵育4小時(shí),,使MTT 還原為甲臜。
6,、吸出上清液,,每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解,用平板搖床搖勻,。
7,、酶標(biāo)儀在570nm 波長(zhǎng)處檢測(cè)每孔的光密度(如無570nm 濾光片,可以使用560-600nm 的濾光片),。
8,、結(jié)果分析
a、細(xì)胞的存活率:將各測(cè)試孔的OD 值減去本底OD 值(*培養(yǎng)基加MTT,,無細(xì)胞)或空白藥物孔OD 值(*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT,,無細(xì)胞),各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD,。細(xì)胞的存活率以T/C%表示,,T 為加藥細(xì)胞的OD 值,C 為對(duì)照細(xì)胞的OD 值,。細(xì)胞存活率% =(加藥細(xì)胞OD/對(duì)照細(xì)胞OD)×100
b,、求出T/C = 50% 時(shí)的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時(shí)的藥物濃度(IC90)
腸沙門氏菌腸炎亞種人降鈣原Anti-TPD52L2 Antibody人顆粒溶(GNLY)
Gillisia sp.大鼠血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子Anti-TPD52L1 Antibody人富組蛋白(HTN5)
酒香酵母大鼠腫瘤壞死因子αAnti-TP53INP2 Antibody人富組蛋白(HTN5)
米根霉人反狀腺原Anti-TPRA1 Antibody人免疫球蛋白樣轉(zhuǎn)錄體受體(ILTsR/LIR/CD85)
大斑凸臍蠕孢人6前列腺F1aAnti-TPT1 Antibody人免疫球蛋白樣轉(zhuǎn)錄體受體(ILTsR/LIR/CD85)
枯草芽孢桿菌枯草亞種大鼠轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β1Anti-TPSD1 Antibody人絲狀血球凝集(FHA)
葡萄座腔菌人戊糖Anti-TPX2 Antibody人絲狀血球凝集(FHA)
短小芽孢桿菌大鼠干因子/肥大生長(zhǎng)因子Anti-TPRA1 Antibody人絨毛蛋白/埃茲蛋白(CVL)
菊池鏈格孢大鼠煙酰腺二核苷磷Anti-TRAF3IP1 Antibody人絨毛蛋白/埃茲蛋白(CVL)
鏈球菌(不定種)人變腎上腺Anti-TRAF3IP2 Antibody人嗜環(huán)蛋白/親環(huán)A(CyPA)
大腸埃希氏桿菌人多巴D1受體Anti-TRADD Antibody人嗜環(huán)蛋白/親環(huán)A(CyPA)
蠟樣芽孢桿菌大鼠血小板衍生生長(zhǎng)因子ABAnti-TRA2A Antibody人肌養(yǎng)蛋白(dystrophin)
羅倫隱球酵母羅倫變種人腎上腺能a1A受體Anti-TRA2A Antibody人肌養(yǎng)蛋白(dystrophin)
谷棒桿菌大鼠血小板衍生生長(zhǎng)因子可溶性受體αAnti-TRADD Antibody人膠原凝集(Collectin)
癭青霉大鼠神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子4Anti-TRAF3IP2 Antibody人膠原凝集(Collectin)
釀酒酵母人早老2Anti-TRAPPC1 Antibody人伴侶蛋白10(CPN10)
泛結(jié)合E2J1抗體麥角1B12株
泛結(jié)合UFC1抗體*大白樁菇人類T細(xì)胞雜交瘤細(xì)胞
泛蛋白連接E2I抗體黑平185鼠/人7系
泛蛋白連接D2抗體槐栓菌抗人SH3-結(jié)構(gòu)域結(jié)合蛋白單抗7
AGC kinase抑制劑(AT13148)光帽鱗傘 去甲氧基醉椒
腸桿屬 去氫駱駝蓬堿
明尼蘇達(dá)被毛孢 曲克蘆丁
嗜熱鏈球 DL-谷氨酰
暗孢節(jié)菱孢 L-谷單鈉鹽
巴氏芽孢桿 L-谷鹽酸鹽
大腸埃希 DL-谷
短芽孢桿 D-谷
枯草芽孢桿 L-谷
球孢白僵 L-胱鹽酸鹽
枯草芽胞桿 氫高烏甲
膠孢 DL-胱
黃桿 L-胱
新日本靈芝 羥基檸檬酸
燼灰鏈霉 L-半胱鹽酸鹽無水物