商品介紹:
DS-1040Tosylate是TAFIa的抑制劑,,用于急性缺血性中風(fēng)的研究。 注:本品僅可用于科研實驗,,嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途,! CAS號:1335138-89-0 純度:99.67% 分子量:465.61 儲存條件:-20℃,有效期2年,,溶入溶劑后-20℃請盡量在一個月內(nèi)使用,。 |
以下是細胞生物學(xué)試劑的詳細介紹:
操作步驟:
1. 樣品染色
1) 將Binding Buffer(10×)稀釋成1×Binding buffer工作液備用(1ml Binding Buffer(10×)需加入9ml無菌去離子水)。
2) 對于懸浮細胞,,500-1000g離心5min收集細胞,。
對于貼壁細胞,要用不含EDTA的胰酶消化細胞,,胰酶消化時間不宜過長或過短,,最好是在輕輕吹打可以使貼壁細胞吹打下來時,加入細胞培養(yǎng)液,,將細胞輕輕吹打下來,,轉(zhuǎn)移到離心管內(nèi),500-1000g離心5min收集細胞,。
3) 收集細胞后,,加入預(yù)冷PBS溶液輕搖或用移液器輕柔吹打洗滌,,離心收集細胞,共洗滌兩次,。
4) 在細胞沉淀中加入1×Binding buffer工作液,,重懸細胞,,使細胞濃度達到1×106 cell/ml,。
5) 吸取100μl細胞懸液(細胞總數(shù)為1×105 cell)至一新管中,加入5μl Annexin V-FITC和5-10 μl PI,,輕輕混勻,,室溫避光孵育15min。
2. 樣品檢測
1) 流式細胞儀檢測:
染色孵育后,,每管加入400μl 1×Binding Buffer工作液,,混勻后使用流式細胞儀檢測(1小時內(nèi)檢測)。
建議設(shè)置經(jīng)凋亡誘導(dǎo)的正常細胞,、PI單染和Annexin V-FITC單染3個對照組,,正常細胞組可作為熒光補償調(diào)節(jié)去除光譜重疊和設(shè)定十字門的位置。結(jié)果可用CellQuest等軟件進行分析,,繪制雙色散點圖(two-color dot plot),,F(xiàn)ITC為橫坐標(biāo),PI為縱坐標(biāo),。Annexin V-FITC和PI聯(lián)合使用時,,活細胞僅有很低強度的背景熒光,早期凋亡細胞僅有較強的綠色熒光,,晚期凋亡細胞有綠色和紅色雙重?zé)晒狻?/span>
2) 熒光顯微鏡檢測:
染色孵育后涂片,,顯微鏡下觀察。使用熒光顯微鏡上的藍光和綠光通道分別觀察FITC和PI,。被Annexin V-FITC結(jié)合的細胞顯示漿膜上有綠色光環(huán),。喪失細胞膜完整性的細胞,細胞核顯示紅色,,膜上有綠色光環(huán),。
公司產(chǎn)品僅用于科研細胞培養(yǎng)操作規(guī)程:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:
1)準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO),90%,;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,,10%。
2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,,95%,;二氧化碳,5%,。 溫度:37℃,,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%血清,10%DMSO,,現(xiàn)用現(xiàn)配,,液氮儲存。
二.細胞處理:
1)復(fù)蘇細胞:將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,,移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻,。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻,。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細胞密度,。
2)細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,,即可進行傳代培養(yǎng)。
對于懸浮細胞,,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細胞,,1000RPM,常溫條件下離心5分鐘,,棄去上清液,,補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中,。
(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: ProbenecidC型凝集結(jié)構(gòu)域家族9成員A抗體包裝5mg
白藜蘆(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Norfloxacin腦鈣粘蛋白12抗體包裝1g
白消安(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Norfloxacin鈣粘蛋白20抗體包裝1g
棓酯(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Norfloxacin HCl鈣粘蛋白29抗體包裝5g
胞嘧啶(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Norfloxacin HClCD200受體抗體包裝1g
胞嘧啶核苷,胞苷(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Indometacin鈣粘蛋白26抗體包裝5g
保泰松(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Indometacin鈣粘蛋白14抗體包裝50mg
保泰松鈣(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Cimetidine鈣激活離子通道蛋白3抗體包裝1g
貝美格(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: CimetidineCD200受體抗體包裝5g
貝那普利拉/那普利拉(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Adefovir dipivoxil彈性蛋白1抗體包裝1g
貝諾酯(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Adefovir dipivoxil干生長因子受體/表面分化抗原抗體包裝5g
蓓薩羅丁(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: R-Pramipexole Dihydrochloride MonohydrateCD99樣蛋白2抗體包裝1g
酯(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Clozapine鈣粘蛋白相關(guān)蛋白CTNNA3抗體包裝250mg
諾龍(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Clozapine緊密連接蛋白15抗體包裝1g
丁氮芥(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Enrofloxacin 緊密連接蛋白12抗體包裝5g
皮氏羅爾斯通氏菌Ralstonia│pickettii 質(zhì)量規(guī)格:>97%血管內(nèi)皮鈣粘著蛋白復(fù)合體試劑盒夏佛塔苷;Schaftoside
白僵菌Beauveria│sp. 質(zhì)量規(guī)格:含量測定血管緊張轉(zhuǎn)化2試劑盒小白菊內(nèi)酯;Parthenolide
百日咳博德特氏菌Bordetella│pertussis 質(zhì)量規(guī)格:>99%,BR血管緊張原試劑盒熊去氧膽;Ursodeoxycholi
TAFIa抑制劑(DS-1040 Tosylate)纖維束1抗體酰烏頭原(標(biāo)準(zhǔn)品) 5-Bromouridine
叉頭蛋白P3抗體酰新烏頭原(標(biāo)準(zhǔn)品) ADA buffer, disodium salt
免疫球蛋白G Fc段受體I酰氧化芍藥苷 Albumin, from bovine Protease free
叉頭蛋白M1抗體比靈,右旋荷包牡丹(標(biāo)準(zhǔn)品) Aluminum stearate
磷化雷帕霉靶蛋白抗體蓽茇(標(biāo)準(zhǔn)品) Bismuth(III) nitrate pentahydrate
磷化粘著斑激抗體蓽澄茄(標(biāo)準(zhǔn)品) Calcium phosphate, dibasic, dihydrate
絲聚合蛋白/中間絲蛋白抗體蓖麻子(標(biāo)準(zhǔn)品) Cerium(III) carbonate, hydrate
肺鼠疫耶爾森氏菌F1莢膜蛋白抗體(C端)蝙蝠葛(標(biāo)準(zhǔn)品) Chymotrypsinogen A
13抗體(纖維蛋白穩(wěn)定因子)蝙蝠葛諾林(標(biāo)準(zhǔn)品) Cibacron blue 3G-A