以下是細胞生物學試劑的詳細介紹:
商品介紹:
Miltefosine是一種PI3K/Akt抑制劑,,大大減少HIV-1從病毒感染的巨噬細胞產(chǎn)生,。 注:本品僅可用于科研實驗,,嚴禁用于臨床醫(yī)療及其他用途,! CAS號:58066-85-6 別名:HePC;Hexadecyl phosphocholine 純度:98.0% 分子量:407.57 儲存條件:-20℃,,有效期2年,,溶入溶劑后-20℃請盡量在一個月內(nèi)使用,。 |
公司產(chǎn)品僅用于科研細胞培養(yǎng)操作規(guī)程:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備:
1)準備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO),,90%;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,,10%,。
2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%,;二氧化碳,,5%。 溫度:37℃,,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%,。
3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配,,液氮儲存,。
二.細胞處理:
1)復(fù)蘇細胞:將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻,。在1000RPM條件下離心4分鐘,,棄去上清液,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻,。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜,。第二天換液并檢查細胞密度。
2)細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,,即可進行傳代培養(yǎng),。
對于懸浮細胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細胞,,1000RPM,,常溫條件下離心5分鐘,棄去上清液,,補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,,將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
操作步驟:
1. 樣品染色
1) 將Binding Buffer(10×)稀釋成1×Binding buffer工作液備用(1ml Binding Buffer(10×)需加入9ml無菌去離子水),。
2) 對于懸浮細胞,,500-1000g離心5min收集細胞。
對于貼壁細胞,,要用不含EDTA的胰酶消化細胞,,胰酶消化時間不宜過長或過短,最好是在輕輕吹打可以使貼壁細胞吹打下來時,,加入細胞培養(yǎng)液,,將細胞輕輕吹打下來,轉(zhuǎn)移到離心管內(nèi),,500-1000g離心5min收集細胞,。
3) 收集細胞后,加入預(yù)冷PBS溶液輕搖或用移液器輕柔吹打洗滌,,離心收集細胞,,共洗滌兩次。
4) 在細胞沉淀中加入1×Binding buffer工作液,,重懸細胞,,使細胞濃度達到1×106 cell/ml。
5) 吸取100μl細胞懸液(細胞總數(shù)為1×105 cell)至一新管中,,加入5μl Annexin V-FITC和5-10 μl PI,,輕輕混勻,,室溫避光孵育15min。
2. 樣品檢測
1) 流式細胞儀檢測:
染色孵育后,,每管加入400μl 1×Binding Buffer工作液,,混勻后使用流式細胞儀檢測(1小時內(nèi)檢測)。
建議設(shè)置經(jīng)凋亡誘導(dǎo)的正常細胞,、PI單染和Annexin V-FITC單染3個對照組,,正常細胞組可作為熒光補償調(diào)節(jié)去除光譜重疊和設(shè)定十字門的位置。結(jié)果可用CellQuest等軟件進行分析,,繪制雙色散點圖(two-color dot plot),,F(xiàn)ITC為橫坐標,PI為縱坐標,。Annexin V-FITC和PI聯(lián)合使用時,,活細胞僅有很低強度的背景熒光,早期凋亡細胞僅有較強的綠色熒光,,晚期凋亡細胞有綠色和紅色雙重熒光,。
2) 熒光顯微鏡檢測:
染色孵育后涂片,顯微鏡下觀察,。使用熒光顯微鏡上的藍光和綠光通道分別觀察FITC和PI,。被Annexin V-FITC結(jié)合的細胞顯示漿膜上有綠色光環(huán)。喪失細胞膜完整性的細胞,,細胞核顯示紅色,,膜上有綠色光環(huán)。
菊苣(毛菊苣)(標準品)英文名稱: Triphenyl phosphateGCNT1葡萄糖轉(zhuǎn)移抗體包裝1g
菊苣英文名稱: Tricosane胰島樣生長因子1受體相互作用蛋白1抗體包裝5g
菊苣(標準品)英文名稱: Undecane鳥苷環(huán)化α1/GCS-α-1抗體包裝1g
橘葉(標準品)英文名稱: Undecanoic acidG蛋白偶聯(lián)受體125抗體包裝5g
巨大戟(標準品)英文名稱: Adipic acidG蛋白偶聯(lián)受體84抗體包裝5g
具棲冬青苷(標準品)英文名稱: AcetamideG蛋白偶聯(lián)受體G2A抗體包裝1g
瞿麥(標準品)英文名稱: p-AnisaldehydeG蛋白偶聯(lián)受體1抗體包裝5g
卷柏(墊狀卷柏)(標準品)英文名稱: Bis(2-ethylhexyl) sebacateG蛋白偶聯(lián)受體100抗體包裝100mg
卷柏(卷柏)(標準品)英文名稱: 1,4-ButanediolG蛋白偶聯(lián)受體101抗體包裝25mg
決明蒽醌;美決明子(標準品)英文名稱: (±)-1,2,4-ButanetriolG蛋白偶聯(lián)受體103抗體包裝25g
決明子(標準品)英文名稱: Methyl decanoateG蛋白偶聯(lián)受體110抗體包裝5g
決明子(小決明)(標準品)英文名稱: Methyl laurateG蛋白偶聯(lián)受體12抗體包裝1mg
爵床(標準品)英文名稱: Methyl palmitate腫瘤血管內(nèi)皮標志物/G蛋白偶聯(lián)受體124抗體包裝5mg
咖啡乙酯(標準品)英文名稱: Methyl salicylateG蛋白偶聯(lián)受體58抗體包裝100g
卡瓦胡椒A英文名稱: Methyl oleateG蛋白偶聯(lián)受體128抗體包裝25g
芽孢桿菌Bacillus│sp. 質(zhì)量規(guī)格:含量測定,標準品輕鏈鐵蛋白試劑盒檸檬 ;Citric acid
??曝愄厥暇?/span>Cobetia│marina 質(zhì)量規(guī)格:>99%,CP,AR試劑盒檸檬烯;Cinene
茄鏈格孢菌Alternaria│solani Sorauer 質(zhì)量規(guī)格:HPLC>98%,標準品青少年2型血色沉著癥/幼年型血色病相關(guān)蛋白2試劑盒女貞苷;ligustroflavone
PI3K/Akt抑制劑(Miltefosine)鹽奧布Human, Mouse, Rat
鹽奧洛他定Human, Mouse
鹽貝那替Human, Mouse, Rat
鹽倍他司汀Human, Mouse
鹽海拉明Human, Mouse
鹽海索Human, Mouse
鹽芐達明Human, Mouse, Rat
鹽卡巴肼/鹽芐肼Human
鹽卡特羅Human, Mouse