商品介紹:
TAK-733是MEK變構(gòu)抑制劑,,對(duì)MEK1的IC50為3.2nM,而對(duì)Abl1,,AKT3,,c-RAF,CamK1,CDK2和c-Met則無(wú)活性,。 注:本品僅可用于科研實(shí)驗(yàn),,嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途! CAS號(hào):1035555-63-5 純度:99.74% 分子量:504.23 儲(chǔ)存條件:-20℃,,有效期2年,,溶入溶劑后-20℃請(qǐng)盡量在一個(gè)月內(nèi)使用。 |
以下是細(xì)胞生物學(xué)試劑的詳細(xì)介紹:
操作步驟:
1. 樣品染色
1) 將Binding Buffer(10×)稀釋成1×Binding buffer工作液備用(1ml Binding Buffer(10×)需加入9ml無(wú)菌去離子水),。
2) 對(duì)于懸浮細(xì)胞,,500-1000g離心5min收集細(xì)胞。
對(duì)于貼壁細(xì)胞,,要用不含EDTA的胰酶消化細(xì)胞,,胰酶消化時(shí)間不宜過(guò)長(zhǎng)或過(guò)短,最好是在輕輕吹打可以使貼壁細(xì)胞吹打下來(lái)時(shí),,加入細(xì)胞培養(yǎng)液,,將細(xì)胞輕輕吹打下來(lái),轉(zhuǎn)移到離心管內(nèi),,500-1000g離心5min收集細(xì)胞,。
3) 收集細(xì)胞后,加入預(yù)冷PBS溶液輕搖或用移液器輕柔吹打洗滌,,離心收集細(xì)胞,,共洗滌兩次。
4) 在細(xì)胞沉淀中加入1×Binding buffer工作液,,重懸細(xì)胞,,使細(xì)胞濃度達(dá)到1×106 cell/ml。
5) 吸取100μl細(xì)胞懸液(細(xì)胞總數(shù)為1×105 cell)至一新管中,,加入5μl Annexin V-FITC和5-10 μl PI,,輕輕混勻,室溫避光孵育15min,。
2. 樣品檢測(cè)
1) 流式細(xì)胞儀檢測(cè):
染色孵育后,每管加入400μl 1×Binding Buffer工作液,,混勻后使用流式細(xì)胞儀檢測(cè)(1小時(shí)內(nèi)檢測(cè)),。
建議設(shè)置經(jīng)凋亡誘導(dǎo)的正常細(xì)胞、PI單染和Annexin V-FITC單染3個(gè)對(duì)照組,,正常細(xì)胞組可作為熒光補(bǔ)償調(diào)節(jié)去除光譜重疊和設(shè)定十字門(mén)的位置,。結(jié)果可用CellQuest等軟件進(jìn)行分析,繪制雙色散點(diǎn)圖(two-color dot plot),,F(xiàn)ITC為橫坐標(biāo),,PI為縱坐標(biāo)。Annexin V-FITC和PI聯(lián)合使用時(shí),活細(xì)胞僅有很低強(qiáng)度的背景熒光,,早期凋亡細(xì)胞僅有較強(qiáng)的綠色熒光,,晚期凋亡細(xì)胞有綠色和紅色雙重?zé)晒狻?/span>
2) 熒光顯微鏡檢測(cè):
染色孵育后涂片,顯微鏡下觀察,。使用熒光顯微鏡上的藍(lán)光和綠光通道分別觀察FITC和PI,。被Annexin V-FITC結(jié)合的細(xì)胞顯示漿膜上有綠色光環(huán)。喪失細(xì)胞膜完整性的細(xì)胞,,細(xì)胞核顯示紅色,,膜上有綠色光環(huán)。
公司產(chǎn)品僅用于科研細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:
1)準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO),,90%,;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%,。
2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,,95%;二氧化碳,,5%,。 溫度:37℃,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%,。
3)凍存液:90%血清,,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配,,液氮儲(chǔ)存,。
二.細(xì)胞處理:
1)復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻,。在1000RPM條件下離心4分鐘,,棄去上清液,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻,。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過(guò)夜,。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2)細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng),。
對(duì)于懸浮細(xì)胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細(xì)胞,,1000RPM,,常溫條件下離心5分鐘,棄去上清液,,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,,將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中,。
金頂側(cè)耳微白蛋白/細(xì)小清蛋白抗原Anti-DP-2 Antibody人神經(jīng)絲蛋白(NF)
炭疽芽孢桿菌酪酪肽多肽(1-36)Anti-DPP7 Antibody人神經(jīng)絲蛋白(NF)
淺灰白鏈霉菌Rad51抗原Anti-DPYSL2 Antibody人尿肽(KP)
蠟狀芽孢桿菌Rap1A抗原Anti-DPYSL2 Antibody人尿肽(KP)
淡青鏈霉菌維甲受體-β抗原Anti-DPPA4 Antibody人神經(jīng)降壓(NT)
大腸埃希氏菌Ras相關(guān)區(qū)域家族1A抗原Anti-DPYSL4 Antibody人神經(jīng)降壓(NT)
青藍(lán)馬杜放線菌抵抗抗原Anti-DPYSL4 Antibody人神經(jīng)激肽B(NKB)
毛霉屬G蛋白信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)調(diào)節(jié)因子2抗原Anti-DQX1 Antibody人神經(jīng)激肽B(NKB)
粘質(zhì)沙雷氏菌RhoA抗原Anti-DRD4 Antibody人強(qiáng)啡肽(Dyn)
大腸埃希氏桿菌RhoC抗原Anti-DROSHA Antibody人強(qiáng)啡肽(Dyn)
皺紋單胞菌環(huán)指蛋白148抗原Anti-DRD1 Antibody人腦啡肽(ENK)
基恩帚枝霉Rho相關(guān)蛋白激1抗原Anti-DROSHA Antibody人腦啡肽(ENK)
釀酒酵母Rho相關(guān)蛋白激2抗原Anti-DSG1 Antibody人γ肽(Pγ)
Bacillus methylotrophicus核受體RXRα抗原Anti-DUSP1 Antibody人γ肽(Pγ)
矩圓黑盤(pán)孢6-磷山梨脫氫抗原Anti-DTYMK Antibody人C型鈉尿肽(CNP)
小麥曲根霉S100B蛋白抗原Anti-DUS2 Antibody人C型鈉尿肽(CNP)
轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子MAZR抗體貝酵母人胃癌細(xì)胞(未分化)
淋巴細(xì)胞胞漿蛋白LCP1抗體白球擬酵母人食管鱗癌細(xì)胞
黑色瘤優(yōu)先表達(dá)抗原抗體沼澤紅假單胞菌小鼠腦神經(jīng)瘤細(xì)胞
磷脂C1樣蛋白抗體類球紅細(xì)菌(球形紅桿菌)人胰腺腺泡上皮癌
MEK變構(gòu)抑制劑(TAK-733)東北毛霉 里靈A
秦氏蜜環(huán) Lasiodiplodin
Bacillus atrophaeus 落葉松樹(shù)脂二甲
地衣芽孢桿 Lansiumarin C
雞傷寒沙門(mén)氏 四乙酸堪酯
渾濁紅球 Kadsurin A
糖化酵母 Juglanin
庫(kù)特氏屬 Isothymusin
新疆類芽孢桿 Isosativan
生脂固氮螺 Isomangiferolic acid
枯草芽孢桿 B 異野葛
月夜 異戈米辛 O
羊肚(不能訂購(gòu)) 異柿醌
近綠曲霉 異木香酸
赭曲霉 Isoboonein