商品介紹:
BMS-265246是CDK1/2抑制劑,,對CDK1/cyclin B和CDK2/cyclin E的IC50分別為6nM和9nM,。 注:本品僅可用于科研實驗,,嚴禁用于臨床醫(yī)療及其他用途,! CAS號:582315-72-8 純度:97.47% 分子量:345.34 儲存條件:-20℃,,有效期2年,,溶入溶劑后-20℃請盡量在一個月內使用。 |
以下是細胞生物學試劑的詳細介紹:
操作步驟:
1. 樣品染色
1) 將Binding Buffer(10×)稀釋成1×Binding buffer工作液備用(1ml Binding Buffer(10×)需加入9ml無菌去離子水),。
2) 對于懸浮細胞,,500-1000g離心5min收集細胞。
對于貼壁細胞,,要用不含EDTA的胰酶消化細胞,,胰酶消化時間不宜過長或過短,最好是在輕輕吹打可以使貼壁細胞吹打下來時,,加入細胞培養(yǎng)液,,將細胞輕輕吹打下來,轉移到離心管內,,500-1000g離心5min收集細胞,。
3) 收集細胞后,加入預冷PBS溶液輕搖或用移液器輕柔吹打洗滌,,離心收集細胞,,共洗滌兩次。
4) 在細胞沉淀中加入1×Binding buffer工作液,,重懸細胞,,使細胞濃度達到1×106 cell/ml。
5) 吸取100μl細胞懸液(細胞總數為1×105 cell)至一新管中,,加入5μl Annexin V-FITC和5-10 μl PI,輕輕混勻,,室溫避光孵育15min,。
2. 樣品檢測
1) 流式細胞儀檢測:
染色孵育后,每管加入400μl 1×Binding Buffer工作液,,混勻后使用流式細胞儀檢測(1小時內檢測),。
建議設置經凋亡誘導的正常細胞、PI單染和Annexin V-FITC單染3個對照組,,正常細胞組可作為熒光補償調節(jié)去除光譜重疊和設定十字門的位置,。結果可用CellQuest等軟件進行分析,繪制雙色散點圖(two-color dot plot),,F(xiàn)ITC為橫坐標,,PI為縱坐標。Annexin V-FITC和PI聯(lián)合使用時,活細胞僅有很低強度的背景熒光,,早期凋亡細胞僅有較強的綠色熒光,,晚期凋亡細胞有綠色和紅色雙重熒光。
2) 熒光顯微鏡檢測:
染色孵育后涂片,,顯微鏡下觀察,。使用熒光顯微鏡上的藍光和綠光通道分別觀察FITC和PI。被Annexin V-FITC結合的細胞顯示漿膜上有綠色光環(huán),。喪失細胞膜完整性的細胞,,細胞核顯示紅色,膜上有綠色光環(huán),。
公司產品僅用于科研細胞培養(yǎng)操作規(guī)程:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備:
1)準備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO),,90%;優(yōu)質胎牛血清,,10%,。
2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%,;二氧化碳,,5%。 溫度:37℃,,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%,。
3)凍存液:90%血清,10%DMSO,,現(xiàn)用現(xiàn)配,,液氮儲存。
二.細胞處理:
1)復蘇細胞:將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,,移入事先準備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻,。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻,。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細胞密度,。
2)細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,,即可進行傳代培養(yǎng)。
對于懸浮細胞,,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細胞,,1000RPM,常溫條件下離心5分鐘,,棄去上清液,,補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,,將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
克魯斯假絲酵母大鼠磷脂酰肌抗體IgG/IgMAnti-TOP2B Antibody人潛伏膜蛋白1(LMP-1)
葡枝根霉人糖蛋白49AAnti-TOP2A Antibody人重組激活基因2(RAG-2)
臘狀芽胞桿菌人抑制β-BAnti-TOP3B Antibody人重組激活基因2(RAG-2)
大腸埃希菌大鼠復合前列腺特異性抗原Anti-TOP3A Antibody人重組激活基因1(RAG-1)
土味鏈霉菌大鼠Anti-TOR1AIP1 Antibody人重組激活基因1(RAG-1)
灰黃青霉人食欲受體Anti-TP53 Antibody人NOD樣受體(NLR)
嗜水氣單胞菌人生長激釋放肽ghrelinAnti-TP53I11 Antibody人NOD樣受體(NLR)
金黃殼囊孢大鼠β干擾Anti-TOX Antibody人視黃誘導基因/RIG-1樣受體(RLR)
植物乳桿菌大鼠血小板因子3Anti-TP53BP2 Antibody人視黃誘導基因/RIG-1樣受體(RLR)
深綠木霉人鈣調Anti-TP53AIP1 Antibody人清道夫受體B(SRB/CD36)
蘆竹節(jié)菱孢菌大鼠可溶性瘦受體Anti-TP53I3 Antibody人清道夫受體B(SRB/CD36)
Hyphomicrobium zavarzinii人真胰島Anti-TP53INP2 Antibody人殺菌肽B(CecB)
釀酒酵母人重去甲腎上腺Anti-TP53INP1 Antibody人殺菌肽B(CecB)
完州郡金黃桿菌大鼠窖蛋白Caveolin1Anti-TP53I3 Antibody人抗菌肽(Att)
檸檬兩面神菌大鼠艾杜糖硫酯Anti-TP63 Antibody人抗菌肽(Att)
西班牙糖絲菌人前列環(huán)Anti-TPD52L2 Antibody人顆粒溶(GNLY)
泛結合E2蛋白A抗體#地衣芽孢桿菌抗補體C4小鼠7
泛蛋白連接J2抗體Ag11(蘑菇)抗補體備解小鼠7
泛蛋白連接M抗體蜜環(huán)菌抗人白蛋白7
泛蛋白連接W抗體牛肝菌屬抗人IgM小鼠7
CDK1/2抑制劑(BMS-265246)香菇 芹菜-7-O-葡萄糖酸苷-6'-乙酯
薄花邊傘 芹菜-7-O-葡萄糖酸苷
糞腸球 5-羥基-6,7-二甲氧基黃酮
枯草芽孢桿 5-羥基-7,8-二甲氧基黃酮
木蹄層孔 去氫荷包牡丹堿
殺鮭氣單胞殺鰈亞種 去氫吳茱萸堿
枯草芽孢桿 青霉
熊蜂生斯塔莫酵母 千金子甾
細枝孢 氫化原堿
越南伯克霍爾德氏 7-羥基-5,8-二甲氧基黃烷酮
釀酒酵母 10-羥基攀援山橙堿
盤長孢狀盤孢 去氧內酯
Microbacterium hydrocarbonoxydans 羥基芫花
雙孢蘑菇 7-羥基馬兜鈴酸A
嗜鹽土地芽孢桿 5-羥基馬鞭草苷