以下是細(xì)胞生物學(xué)試劑的詳細(xì)介紹:
公司產(chǎn)品僅用于科研細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:
1)準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO),90%;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,,10%,。
2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,,5%,。 溫度:37℃,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%,。
3)凍存液:90%血清,,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配,,液氮儲(chǔ)存,。
二.細(xì)胞處理:
1)復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻,。在1000RPM條件下離心4分鐘,,棄去上清液,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻,。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜,。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2)細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng),。
對(duì)于懸浮細(xì)胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細(xì)胞,,1000RPM,,常溫條件下離心5分鐘,棄去上清液,,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,,將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
商品介紹:
inS3-54A18是有一種有效的STAT3抑制劑,,具有抗癌作用,。 注:本品僅可用于科研實(shí)驗(yàn),嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途,! CAS號(hào):328998-53-4 純度:98.0% 分子量:373.83 儲(chǔ)存條件:-20℃,,有效期2年,溶入溶劑后-20℃請(qǐng)盡量在一個(gè)月內(nèi)使用,。 |
操作步驟:
1. 樣品染色
1) 將Binding Buffer(10×)稀釋成1×Binding buffer工作液備用(1ml Binding Buffer(10×)需加入9ml無菌去離子水),。
2) 對(duì)于懸浮細(xì)胞,500-1000g離心5min收集細(xì)胞,。
對(duì)于貼壁細(xì)胞,,要用不含EDTA的胰酶消化細(xì)胞,胰酶消化時(shí)間不宜過長(zhǎng)或過短,,最好是在輕輕吹打可以使貼壁細(xì)胞吹打下來時(shí),,加入細(xì)胞培養(yǎng)液,,將細(xì)胞輕輕吹打下來,轉(zhuǎn)移到離心管內(nèi),,500-1000g離心5min收集細(xì)胞,。
3) 收集細(xì)胞后,加入預(yù)冷PBS溶液輕搖或用移液器輕柔吹打洗滌,,離心收集細(xì)胞,,共洗滌兩次。
4) 在細(xì)胞沉淀中加入1×Binding buffer工作液,,重懸細(xì)胞,,使細(xì)胞濃度達(dá)到1×106 cell/ml。
5) 吸取100μl細(xì)胞懸液(細(xì)胞總數(shù)為1×105 cell)至一新管中,,加入5μl Annexin V-FITC和5-10 μl PI,,輕輕混勻,室溫避光孵育15min,。
2. 樣品檢測(cè)
1) 流式細(xì)胞儀檢測(cè):
染色孵育后,每管加入400μl 1×Binding Buffer工作液,,混勻后使用流式細(xì)胞儀檢測(cè)(1小時(shí)內(nèi)檢測(cè)),。
建議設(shè)置經(jīng)凋亡誘導(dǎo)的正常細(xì)胞、PI單染和Annexin V-FITC單染3個(gè)對(duì)照組,,正常細(xì)胞組可作為熒光補(bǔ)償調(diào)節(jié)去除光譜重疊和設(shè)定十字門的位置,。結(jié)果可用CellQuest等軟件進(jìn)行分析,繪制雙色散點(diǎn)圖(two-color dot plot),,F(xiàn)ITC為橫坐標(biāo),,PI為縱坐標(biāo)。Annexin V-FITC和PI聯(lián)合使用時(shí),,活細(xì)胞僅有很低強(qiáng)度的背景熒光,,早期凋亡細(xì)胞僅有較強(qiáng)的綠色熒光,晚期凋亡細(xì)胞有綠色和紅色雙重?zé)晒狻?/span>
2) 熒光顯微鏡檢測(cè):
染色孵育后涂片,,顯微鏡下觀察,。使用熒光顯微鏡上的藍(lán)光和綠光通道分別觀察FITC和PI。被Annexin V-FITC結(jié)合的細(xì)胞顯示漿膜上有綠色光環(huán),。喪失細(xì)胞膜完整性的細(xì)胞,,細(xì)胞核顯示紅色,膜上有綠色光環(huán),。
小鼠脂聯(lián)素(human adiponectin)ELISA試劑盒 ,,英文名: human adiponectin ELISA Kit
牛的牛血清白蛋白殘留檢測(cè)ELISA檢測(cè)試劑盒Bovinerudimealbovineserumalbumincheck-upELISAKit 96T/48T
人AP-5復(fù)合物β亞基(PP1030)免疫試劑盒 human PP1030 ELISA Kit
英文名稱MouseIL-2sRαELISAkit小鼠白介素2可溶性受體α鏈(CD25)(IL-2sRα)規(guī)格:96T/48T
冰凍切片總膽固醇高氯酸萘醌(PAN)染色試劑盒50次
Ratcholesterol,CHELISA試劑盒大鼠膽固醇(CH)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
小鼠白介素12(IL-12/P70)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
Rat neuropeptide Y (NP-Y) ELISA Kit 大鼠神經(jīng)肽Y(NP-Y)ELISA試劑盒
Humaarate-resistaacidphosphatase5b,ACP-5bELISAKit 人抗酸性磷酸酶5b(ACP-5b)ELISA試劑盒 96T/48T 分裝
HumanCaspase3,Casp-3ELISA試劑盒人胱天蛋白酶3(Casp-3)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
轉(zhuǎn)基因棉花MON88913品系基因檢測(cè)試劑盒20次
humansinglesandedDNAAibody,ssDNAELISAKit人抗單鏈DNA抗體/變性DNA抗體(ssDNA)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
豬基質(zhì)金屬蛋白酶抑制因子1(TIMP-1)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
Human collagenase II (Collagenase II) ELISA Kit 人膠原酶II(Collagenase II)ELISA試劑盒
PorcineEsadiolreceptor,ERELISAKit 豬雌二醇受體(ER)ELISA試劑盒 96T/48T 分裝
CLIAKitforAlpha-SMA(HumanAlpha-Smoothmuscleactin)ELISAKit人α平滑肌肌動(dòng)蛋白規(guī)格:48T/96T
血液肌酐(CREATININE)酶連續(xù)反應(yīng)比色法定量檢測(cè)試劑盒20次
Plaphosphatidylglycerol,PGELISAKit植物磷脂酰甘油(PG)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
STAT3抑制劑(inS3-54A18)4 Hydroxynonenal 英文名稱: 4羥基壬烯酸抗體 0.1ml
FEN1 英文名稱: 結(jié)構(gòu)特異性核酸酶FEN1抗體 0.2ml
黑色素瘤相關(guān)抗原/黑色素-A抗體 Anti-Melan-A/MART-1 0.1ml
Anti-RPLP0/FITC 熒光素標(biāo)記酸性核糖體磷蛋白大亞基P0抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Rhesus antibody Rh phospho-PI3K/PIK3CD(Tyr524) 磷酸化磷脂酰肌醇激酶催化亞單位D抗體 規(guī)格 0.1ml
ACTH (Adrenorticotrophin hormons)(18-39) 促腎上腺皮質(zhì)激素(18-39)(抗原)Multi-class antibodies規(guī)格: 0.5mg