PDE5抑制劑（Sildenafil citrate）公司*的產(chǎn)品：Anti-gp130/IL-6R /FITC 熒光素標(biāo)記白介素-6受體抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml
Anti-prox-1 /FITC 熒光素標(biāo)記兔抗人,、大,、小鼠prox-1蛋白抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml
Rhesus antibody

產(chǎn)品屬性：

中文名稱：PDE5抑制劑（Sildenafil citrate）

英文名稱：Sildenafil citrate

產(chǎn)品規(guī)格：1mL(10mM)|10mg|50mg|100mg

發(fā)貨周期：1～3天
公司產(chǎn)品僅用于科研

商品介紹：

細(xì)胞生物學(xué)研究有以下幾個(gè)方面：

細(xì)胞生物學(xué)的研究內(nèi)容十分廣泛,主要包括：

①細(xì)胞核、染色體以及基因表達(dá)的研究,；

②生物膜與細(xì)胞器的研究,；

③細(xì)胞骨架體系的研究；

④細(xì)胞增殖及其調(diào)控,；

⑤細(xì)胞分化及其調(diào)控,；

⑥細(xì)胞的衰老與編程性死亡(凋亡)；

⑦細(xì)胞的起源與進(jìn)化,；

⑧細(xì)胞工程.

實(shí)驗(yàn)報(bào)告：

一,、分離與培養(yǎng)：

1、無菌條件下,，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將1mm3左右大??；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶）,，混懸10s,，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液,，自然沉淀并收集上清,，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3,、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液,，混懸10s，置37℃消化10 min后,，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化,；

4,、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min,，棄去上清,，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶,，放置于37℃ ,，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5,、差速貼壁1h后,，吸出培養(yǎng)基,，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；

二,、免疫熒光鑒定：

1,、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時(shí)，棄去培養(yǎng)基,，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次,，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min,；

2,、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min,，然后在4℃條件下,，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3,、PBS沖洗細(xì)胞2次,，每次10min，然后在室溫條件下,，用4% BSA封閉細(xì)胞30min,；

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜,；

5、PBS沖洗細(xì)胞3次,，每次10min,，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h,；

6,、用PBS沖洗3次，每次10min,，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照,。

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PDE5抑制劑（Sildenafil citrate）雙(環(huán)戊二烯)二化釩 

操作規(guī)程

1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔,，通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升2000個(gè)細(xì)胞,，細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升5000～10000個(gè)細(xì)胞（具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目,，需根據(jù)細(xì)胞的大小,，細(xì)胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí).

2,、.加入適當(dāng)濃度的0～10μL 受試化合物,。

3,、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時(shí)間,。

4,、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5,、每孔加50μL 1× MTT 溶液,，在37℃孵育4小時(shí)，使MTT 還原為甲臜,。

6,、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解,，用平板搖床搖勻,。

7、酶標(biāo)儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度（如無570nm 濾光片,，可以使用560-600nm 的濾光片）,。

8、結(jié)果分析

a,、細(xì)胞的存活率：將各測試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT,，無細(xì)胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無細(xì)胞）,，各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD,。細(xì)胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細(xì)胞的OD 值,，C 為對照細(xì)胞的OD 值,。細(xì)胞存活率% =（加藥細(xì)胞OD/對照細(xì)胞OD）×100

b、求出T/C = 50% 時(shí)的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時(shí)的藥物濃度(IC90)