以下是細胞生物學(xué)試劑的詳細介紹:
公司產(chǎn)品僅用于科研細胞培養(yǎng)操作規(guī)程:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備:
1)準備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO),,90%;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,,10%,。
2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,,5%,。 溫度:37℃,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%,。
3)凍存液:90%血清,,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配,,液氮儲存,。
二.細胞處理:
1)復(fù)蘇細胞:將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻,。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻,。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細胞密度,。
2)細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,,即可進行傳代培養(yǎng)。
對于懸浮細胞,,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細胞,,1000RPM,常溫條件下離心5分鐘,,棄去上清液,,補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中,。
商品介紹:
Omapatrilat是金屬蛋白酶ACE和NEP的雙重抑制劑,,Ki值分別為0.64和0.45nM。 注:本品僅可用于科研實驗,,嚴禁用于臨床醫(yī)療及其他用途,! CAS號:167305-00-2 別名:BMS-186716 純度:97.22% 分子量:408.53 儲存條件:-20℃,有效期2年,,溶入溶劑后-20℃請盡量在一個月內(nèi)使用,。 |
操作步驟:
1. 樣品染色
1) 將Binding Buffer(10×)稀釋成1×Binding buffer工作液備用(1ml Binding Buffer(10×)需加入9ml無菌去離子水)。
2) 對于懸浮細胞,,500-1000g離心5min收集細胞,。
對于貼壁細胞,要用不含EDTA的胰酶消化細胞,,胰酶消化時間不宜過長或過短,,最好是在輕輕吹打可以使貼壁細胞吹打下來時,,加入細胞培養(yǎng)液,將細胞輕輕吹打下來,,轉(zhuǎn)移到離心管內(nèi),,500-1000g離心5min收集細胞。
3) 收集細胞后,,加入預(yù)冷PBS溶液輕搖或用移液器輕柔吹打洗滌,,離心收集細胞,共洗滌兩次,。
4) 在細胞沉淀中加入1×Binding buffer工作液,,重懸細胞,使細胞濃度達到1×106 cell/ml,。
5) 吸取100μl細胞懸液(細胞總數(shù)為1×105 cell)至一新管中,,加入5μl Annexin V-FITC和5-10 μl PI,輕輕混勻,,室溫避光孵育15min,。
2. 樣品檢測
1) 流式細胞儀檢測:
染色孵育后,每管加入400μl 1×Binding Buffer工作液,,混勻后使用流式細胞儀檢測(1小時內(nèi)檢測),。
建議設(shè)置經(jīng)凋亡誘導(dǎo)的正常細胞,、PI單染和Annexin V-FITC單染3個對照組,,正常細胞組可作為熒光補償調(diào)節(jié)去除光譜重疊和設(shè)定十字門的位置。結(jié)果可用CellQuest等軟件進行分析,,繪制雙色散點圖(two-color dot plot),,F(xiàn)ITC為橫坐標,PI為縱坐標,。Annexin V-FITC和PI聯(lián)合使用時,,活細胞僅有很低強度的背景熒光,早期凋亡細胞僅有較強的綠色熒光,,晚期凋亡細胞有綠色和紅色雙重?zé)晒狻?/span>
2) 熒光顯微鏡檢測:
染色孵育后涂片,,顯微鏡下觀察。使用熒光顯微鏡上的藍光和綠光通道分別觀察FITC和PI,。被Annexin V-FITC結(jié)合的細胞顯示漿膜上有綠色光環(huán),。喪失細胞膜完整性的細胞,細胞核顯示紅色,,膜上有綠色光環(huán),。
Pregnenolone(標準品)英文名稱: 6-TG/ThioguanineCD9蛋白抗體包裝100g
Progesterone(標準品)英文名稱: 6-TG/ThioguanineCD23/FcεRII抗體包裝25g
Promestriene(標準品)英文名稱: All-Trans-Retinoic Acid\TretinoinCD27抗體包裝500g
RNH-奧美沙坦酯雜質(zhì)(標準品)英文名稱: All-Trans-Retinoic Acid\TretinoinCD30抗體包裝25g
Rosiglitazone HCL (標準品)英文名稱: BicalutamideCD43抗體包裝5g
Rosiglitazone Maleate(標準品)英文名稱: BicalutamideCD48抗體包裝1g
Rosiglitazone(標準品)英文名稱: Busulfan/MyleranCD44抗體包裝5g
Sitagliptin phosphate monoh...英文名稱: Busulfan/Myleran整合αX抗體包裝100g
Sivelestat sodium (標準品)英文名稱: Lomustine表面趨化因子受體5抗體包裝25g
Sorafenib tosylate(標準品)英文名稱: LomustineCD2抗體包裝25g
Stanozolol(標準品)英文名稱: Hydroxyurea/HydroxycarbamideC-肽抗體包裝5g
Tamoxifen Citrate (標準品)英文名稱: Hydroxyurea/Hydroxycarbamide鈣結(jié)合蛋白抗體包裝1g
Tetrabenazine(標準品)英文名稱: Toremifene CitrateC-反應(yīng)蛋白抗體包裝5g
Toremifene Citrate(標準品)英文名稱: Toremifene CitrateC-反應(yīng)蛋白單克抗體包裝100g
Triamcinolone Acetonide(標準品...英文名稱: Toremifene Citrate環(huán)腺苷應(yīng)答元件結(jié)合蛋白抗體包裝25g
產(chǎn)黑假交替單胞菌Pseudoalteromonas│nigrifaciens 質(zhì)量規(guī)格:HPLC>98%,標準品血管抑/血管穩(wěn)定蛋白試劑盒血竭;Cochinchinenin
: =ATCC35674資源名稱: 自養(yǎng)黃色桿菌 質(zhì)量規(guī)格:>98%,5-HT2A高效選擇性激動劑血管性血友病因子裂解試劑盒西貝母堿苷;Sipeimine-3β-D
耐熱克魯維酵母Kluyveromyces│thermotolerans 質(zhì)量規(guī)格:>99%血管舒緩激肽試劑盒繡球酚 ;Hydrangenol
ACE和NEP雙重抑制劑(Omapatrilat)纖維母表面蛋白抗體五加苷E(標準品) Aluminum oxide, active
前列腺E受體4相關(guān)蛋白抗體五加皂苷B(標準品) Aluminum oxide, active
FLAG Tag標簽抗體(N端)楤木(標準品) Aluminum potassium sulfate docecahydrate
成纖維生長因子受體2抗體楤木皂苷A Amikacin
成纖維生長因子受體4抗體粗葉懸鉤子甙 Aminophyllin hydrate
凝血原(纖維介)抗體醋辛酯(標準品) Ammonium bismuth citrate, hydrate
衰老關(guān)鍵蛋白抗體大波斯菊苷,芹菜-7-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(標準... Ammonium bromide
凋亡調(diào)節(jié)因之一抗體大車前苷(標準品) Ammonium iodide
凋亡調(diào)節(jié)因之一抗體(短型)大豆苷,黃豆苷 (標準品) Ammonium iron(II) sulfate, hexahydrate