商品介紹:
Alvespimycin hydrochloride是一種有效的Hsp90抑制劑,,結合到Hsp90,EC50為62±29nM,。 注:本品僅可用于科研實驗,,嚴禁用于臨床醫(yī)療及其他用途! CAS號:467214-21-7 別名:17-DMAG;KOS-1022;NSC 707545 純度:99.32% 分子量:653.21 儲存條件:-20℃,,有效期2年,,溶入溶劑后-20℃請盡量在一個月內使用。 |
以下是細胞生物學試劑的詳細介紹:
中文名稱 | 英文名稱 | 產(chǎn)品規(guī)格 | 發(fā)貨周期 |
Hsp90抑制劑 | Alvespimycin hydrochloride | 1mL(10mM)|10mg|25mg|100mg|200mg|500mg | 1~3天 |
操作步驟:
1. 樣品染色
1) 將Binding Buffer(10×)稀釋成1×Binding buffer工作液備用(1ml Binding Buffer(10×)需加入9ml無菌去離子水),。
2) 對于懸浮細胞,,500-1000g離心5min收集細胞。
對于貼壁細胞,,要用不含EDTA的胰酶消化細胞,,胰酶消化時間不宜過長或過短,最好是在輕輕吹打可以使貼壁細胞吹打下來時,,加入細胞培養(yǎng)液,,將細胞輕輕吹打下來,轉移到離心管內,,500-1000g離心5min收集細胞,。
3) 收集細胞后,,加入預冷PBS溶液輕搖或用移液器輕柔吹打洗滌,離心收集細胞,,共洗滌兩次,。
4) 在細胞沉淀中加入1×Binding buffer工作液,重懸細胞,,使細胞濃度達到1×106 cell/ml,。
5) 吸取100μl細胞懸液(細胞總數(shù)為1×105 cell)至一新管中,加入5μl Annexin V-FITC和5-10 μl PI,,輕輕混勻,,室溫避光孵育15min。
2. 樣品檢測
1) 流式細胞儀檢測:
染色孵育后,,每管加入400μl 1×Binding Buffer工作液,,混勻后使用流式細胞儀檢測(1小時內檢測)。
建議設置經(jīng)凋亡誘導的正常細胞,、PI單染和Annexin V-FITC單染3個對照組,,正常細胞組可作為熒光補償調節(jié)去除光譜重疊和設定十字門的位置。結果可用CellQuest等軟件進行分析,,繪制雙色散點圖(two-color dot plot),,F(xiàn)ITC為橫坐標,PI為縱坐標,。Annexin V-FITC和PI聯(lián)合使用時,,活細胞僅有很低強度的背景熒光,早期凋亡細胞僅有較強的綠色熒光,,晚期凋亡細胞有綠色和紅色雙重熒光,。
2) 熒光顯微鏡檢測:
染色孵育后涂片,顯微鏡下觀察,。使用熒光顯微鏡上的藍光和綠光通道分別觀察FITC和PI,。被Annexin V-FITC結合的細胞顯示漿膜上有綠色光環(huán)。喪失細胞膜完整性的細胞,,細胞核顯示紅色,,膜上有綠色光環(huán)。
公司產(chǎn)品僅用于科研細胞培養(yǎng)操作規(guī)程:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備:
1)準備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO),,90%,;優(yōu)質胎牛血清,10%,。
2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,,95%;二氧化碳,,5%,。 溫度:37℃,,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%血清,,10%DMSO,,現(xiàn)用現(xiàn)配,液氮儲存,。
二.細胞處理:
1)復蘇細胞:將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,,移入事先準備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,,棄去上清液,,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜,。第二天換液并檢查細胞密度,。
2)細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養(yǎng),。
對于懸浮細胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細胞,,1000RPM,,常溫條件下離心5分鐘,棄去上清液,,補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,,將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
孢小克銀漢霉泛蛋白連接D1抗體Anti-LOXL1 Antibody神經(jīng)調節(jié)3(NRG3)
褐球固氮菌泛蛋白連接C抗體Anti-LPA(Apo A) Antibody神經(jīng)調節(jié)2(NRG2)
油菜菌核病菌泛蛋白連接E2I抗體Anti-LPAR6 Antibody神經(jīng)調節(jié)1(NRG1)
皮狀假絲酵母泛蛋白連接D2抗體Anti-LPXN Antibody神經(jīng)肽Y受體Y5(NPY5R)
糞腸球菌泛蛋白連接G2抗體Anti-LPP Antibody神經(jīng)肽Y受體Y2(NPY2R)
白地霉泛蛋白連接L3抗體Anti-LPP Antibody神經(jīng)肽Y受體Y1(NPY1R)
路德類酵母泛蛋白連接2N抗體Anti-LPP Antibody神經(jīng)肽Y(NPY)
雞傷寒沙門氏菌葡萄糖神經(jīng)酰合成抗體Anti-LRIG1 Antibody神經(jīng)肽W(NPW)
耐鹽枝孢菌泛結合E2樣蛋白抗體Anti-LRIG3 Antibody神經(jīng)肽VF(NPVF)
枯草芽孢桿菌枯草亞種尿嘧啶核苷磷化1抗體Anti-LRP5 Antibody神經(jīng)肽S受體(NPSR)
纖維纖維單胞菌肌營養(yǎng)不良蛋白相關蛋白1抗體Anti-LRP1 Antibody神經(jīng)肽S(NPS)
AuranobacterUL16結合蛋白1蛋白抗體Anti-LRP6 Antibody神經(jīng)肽FF(NPFF)
喬木鏈格孢UL16結合蛋白2抗體Anti-LRPPRC Antibody神經(jīng)肽B(NPB)
白黃鏈霉菌尿苷酰二磷葡萄糖焦磷化2抗體Anti-LRRC32 Antibody神經(jīng)損傷誘導蛋白2(NINJ2)
Rhizobiales質子梯度調節(jié)蛋白1抗體Anti-LRRK2 Antibody神經(jīng)損傷誘導蛋白1(NINJ1)
枯草芽胞桿菌枯草亞種泛結構域蛋白1抗體Anti-LSM2 Antibody神經(jīng)絲束蛋白(NPTN)
微管卷曲蛋白SYNC抗體弗勞地檸檬桿菌大鼠腎成纖維細胞
鈉通道亞基β4抗體普通擬桿菌大鼠尿道上皮細
基質交感分子1抗體嗜熱棲熱菌大鼠輸尿管上皮細胞
血清淀粉樣蛋白4抗體高加索奶乳桿菌大鼠腎管狀上皮細胞
Hsp90抑制劑羊肚 蓖麻油Na-K-ATPElisa
黃綠口蘑 氧化釤P450膽固側鏈裂解Elisa
豌豆根瘤 氧化釹α干擾Elisa
茄圓屬 氧化鑭α酮戊二酸脫氫Elisa
巴斯德畢赤酵母 氧化釓γ-谷氨酰轉肽Elisa
香菇 氧化銪δ氨基乙酰酸脫水Elisa
畢赤酵母 氧化鉺白介1Elisa
南海芽孢桿 氧化鏑白介1βElisa
干酪乳桿 燒堿石棉白介6Elisa
釀酒酵母 燒堿石棉白介8Elisa
孟氏假單胞 乙酸鎳表皮生長因子Elisa
大腸埃希 堿式碳酸鎳氨酸氨基轉移Elisa
Bacillus subtilis subsp. subtilis 三氧化二鎳二Elisa
納西桿屬 硫酸鍶酮酸激Elisa
禾頂囊殼 碳酸鍶酮酸羧化Elisa