商品介紹:
USP7/USP47inhibitor是USP7/USP47的抑制劑,,IC50分別為0.42uM和1.0uM,。 注:本品僅可用于科研實(shí)驗(yàn),,嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途,! CAS號(hào):1247825-37-1 純度:98.17% 分子量:484.4 儲(chǔ)存條件:-20℃,,有效期2年,,溶入溶劑后-20℃請(qǐng)盡量在一個(gè)月內(nèi)使用。 |
以下是細(xì)胞生物學(xué)試劑的詳細(xì)介紹:
操作步驟:
1. 樣品染色
1) 將Binding Buffer(10×)稀釋成1×Binding buffer工作液備用(1ml Binding Buffer(10×)需加入9ml無(wú)菌去離子水),。
2) 對(duì)于懸浮細(xì)胞,,500-1000g離心5min收集細(xì)胞。
對(duì)于貼壁細(xì)胞,,要用不含EDTA的胰酶消化細(xì)胞,,胰酶消化時(shí)間不宜過(guò)長(zhǎng)或過(guò)短,最好是在輕輕吹打可以使貼壁細(xì)胞吹打下來(lái)時(shí),,加入細(xì)胞培養(yǎng)液,,將細(xì)胞輕輕吹打下來(lái),轉(zhuǎn)移到離心管內(nèi),,500-1000g離心5min收集細(xì)胞,。
3) 收集細(xì)胞后,,加入預(yù)冷PBS溶液輕搖或用移液器輕柔吹打洗滌,離心收集細(xì)胞,,共洗滌兩次,。
4) 在細(xì)胞沉淀中加入1×Binding buffer工作液,重懸細(xì)胞,,使細(xì)胞濃度達(dá)到1×106 cell/ml,。
5) 吸取100μl細(xì)胞懸液(細(xì)胞總數(shù)為1×105 cell)至一新管中,加入5μl Annexin V-FITC和5-10 μl PI,,輕輕混勻,,室溫避光孵育15min。
2. 樣品檢測(cè)
1) 流式細(xì)胞儀檢測(cè):
染色孵育后,,每管加入400μl 1×Binding Buffer工作液,,混勻后使用流式細(xì)胞儀檢測(cè)(1小時(shí)內(nèi)檢測(cè))。
建議設(shè)置經(jīng)凋亡誘導(dǎo)的正常細(xì)胞,、PI單染和Annexin V-FITC單染3個(gè)對(duì)照組,,正常細(xì)胞組可作為熒光補(bǔ)償調(diào)節(jié)去除光譜重疊和設(shè)定十字門(mén)的位置。結(jié)果可用CellQuest等軟件進(jìn)行分析,,繪制雙色散點(diǎn)圖(two-color dot plot),F(xiàn)ITC為橫坐標(biāo),,PI為縱坐標(biāo),。Annexin V-FITC和PI聯(lián)合使用時(shí),活細(xì)胞僅有很低強(qiáng)度的背景熒光,,早期凋亡細(xì)胞僅有較強(qiáng)的綠色熒光,,晚期凋亡細(xì)胞有綠色和紅色雙重?zé)晒狻?/span>
2) 熒光顯微鏡檢測(cè):
染色孵育后涂片,顯微鏡下觀察,。使用熒光顯微鏡上的藍(lán)光和綠光通道分別觀察FITC和PI,。被Annexin V-FITC結(jié)合的細(xì)胞顯示漿膜上有綠色光環(huán)。喪失細(xì)胞膜完整性的細(xì)胞,,細(xì)胞核顯示紅色,,膜上有綠色光環(huán)。
公司產(chǎn)品僅用于科研細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:
1)準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO),,90%,;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%,。
2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,,95%;二氧化碳,,5%,。 溫度:37℃,,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%血清,,10%DMSO,,現(xiàn)用現(xiàn)配,液氮儲(chǔ)存,。
二.細(xì)胞處理:
1)復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,,移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,,棄去上清液,,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過(guò)夜,。第二天換液并檢查細(xì)胞密度,。
2)細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng),。
對(duì)于懸浮細(xì)胞,,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細(xì)胞,1000RPM,,常溫條件下離心5分鐘,,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,,將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中,。
假單胞菌Alexa Fluor 488標(biāo)記的小鼠抗豚鼠IgGAnti-TFF3 Antibody鈣蛋白13(CAPN13)
干酪乳桿菌Alexa Fluor 555標(biāo)記的小鼠抗豚鼠IgGAnti-TFF3 Antibody鈣蛋白12(CAPN12)
根串珠霉Alexa Fluor 647標(biāo)記的小鼠抗豚鼠IgGAnti-TFPI Antibody鈣蛋白11(CAPN11)
樟疫霉PE-Cy5.5標(biāo)記的小鼠抗豚鼠IgGAnti-TFPI Antibody鈣蛋白10(CAPN10)
大腸埃希氏桿菌堿性磷(AP)標(biāo)記的小鼠抗豚鼠IgGAnti-TFF3 Antibody鈣蛋白1(CAPN1)
芽孢桿菌FITC標(biāo)記的小鼠抗豚鼠IgGAnti-TFPI2 Antibody富酪蛋白(STATH)
腸膜明串珠菌腸膜亞種Cy3標(biāo)記的小鼠抗豚鼠IgGAnti-TFPI2 Antibody副腫瘤抗原MA2(PNMA2)
桑格利娜氏鏈霉菌Cy5標(biāo)記的小鼠抗豚鼠IgGAnti-TFRC Antibody復(fù)制啟動(dòng)因子1(REPIN1)
假單胞菌Cy5.5標(biāo)記的小鼠抗豚鼠IgGAnti-TGFA Antibody復(fù)制蛋白A1(RPA1)
Sphingomonas fauciumCy7標(biāo)記的小鼠抗豚鼠IgGAnti-TFRC Antibody(PB0230)復(fù)合4(CPLX4)
韓國(guó)戴氏菌PE標(biāo)記的小鼠抗豚鼠IgGAnti-TGFB1(TGFβ1) Antibody復(fù)合3(CPLX3)
金針菇F2211PE-Cy3標(biāo)記的小鼠抗豚鼠IgGAnti-TGFBR2 Antibody復(fù)合2(CPLX2)
胞外多聚物鞘單胞菌羅丹明標(biāo)記的小鼠抗豚鼠IgGAnti-TGFBR1 Antibody復(fù)合1(CPLX1)
賽維瓦爾假單胞菌羅丹明標(biāo)記的兔抗親和Anti-TGFBR1 Antibody輔Q10同源物B(COQ10B)
紅緣層孔菌FITC標(biāo)記的兔抗親和Anti-TGFB2 Antibody輔激活因子激活因子(COAA)
根瘤菌堿性磷(AP)標(biāo)記的兔抗親和Anti-TGFBR1 Antibody輔肌動(dòng)蛋白α4(ACTN4)
蛋白酪磷CD148抗體粗毛栓菌人關(guān)節(jié)軟骨組織提取物
磷甘油脫氫抗體糞產(chǎn)堿桿菌人成骨組織提取物
蛋白激Cnu型抗體涅氏小短桿菌人睪丸支持組織提取物
磷吡哆氧化抗體埃氏慢生根瘤菌人子宮頸組織提取物
USP7/USP47抑制劑(USP7/USP47 inhibitor)里氏木霉 羅漢果苷IIe
香菇* 柳杉酚; 10-脫氧代黃檜
靈芝(紅芝, 赤芝) 新隱丹參酮
黎巴嫩鏈霉紅色亞種 亞甲基丹參醌
黑木耳 6-羥基柳杉酚
長(zhǎng)枝木霉 20-去氧鼠尾草酚
固氮 化失車(chē)菊-3-O-桑布雙糖苷
運(yùn)動(dòng)節(jié)桿 槲皮3-O-葡萄糖酸苷
大腸埃希 化飛燕草-3-O-桑布雙糖苷
蠟?zāi)?/span> 化天竺葵-3,5-O-雙葡萄糖苷
光滑鱗傘 化天竺葵-3,5-O-雙葡萄糖苷
唐菖蒲伯克霍爾德 15-表-丹參 A
多黏類芽孢桿 丹參A
艾丁鹽盒 鼠尾草酮
灰略紅鏈霉 去氫丹參酮IIA