以下是細胞生物學(xué)試劑的詳細介紹:
商品介紹:
2-Cl-IB-MECA是一個選擇性的A3adenosine受體的激動劑,選擇性分別是A1,,A2的2500到1400倍,。 注:本品僅可用于科研實驗,,嚴禁用于臨床醫(yī)療及其他用途,! CAS號:163042-96-4 別名:Chloro-IB-MECA;CF-102;CI-IB-MECA 純度:99.51% 分子量:544.73 儲存條件:-20℃,,有效期2年,,溶入溶劑后-20℃請盡量在一個月內(nèi)使用。 |
公司產(chǎn)品僅用于科研細胞培養(yǎng)操作規(guī)程:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備:
1)準備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO),,90%,;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%,。
2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,,95%;二氧化碳,,5%,。 溫度:37℃,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%,。
3)凍存液:90%血清,,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配,,液氮儲存,。
二.細胞處理:
1)復(fù)蘇細胞:將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻,。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻,。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細胞密度,。
2)細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,,即可進行傳代培養(yǎng)。
對于懸浮細胞,,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細胞,,1000RPM,常溫條件下離心5分鐘,,棄去上清液,,補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中,。
操作步驟:
1. 樣品染色
1) 將Binding Buffer(10×)稀釋成1×Binding buffer工作液備用(1ml Binding Buffer(10×)需加入9ml無菌去離子水),。
2) 對于懸浮細胞,500-1000g離心5min收集細胞,。
對于貼壁細胞,,要用不含EDTA的胰酶消化細胞,,胰酶消化時間不宜過長或過短,最好是在輕輕吹打可以使貼壁細胞吹打下來時,,加入細胞培養(yǎng)液,,將細胞輕輕吹打下來,轉(zhuǎn)移到離心管內(nèi),,500-1000g離心5min收集細胞,。
3) 收集細胞后,加入預(yù)冷PBS溶液輕搖或用移液器輕柔吹打洗滌,,離心收集細胞,,共洗滌兩次。
4) 在細胞沉淀中加入1×Binding buffer工作液,,重懸細胞,,使細胞濃度達到1×106 cell/ml。
5) 吸取100μl細胞懸液(細胞總數(shù)為1×105 cell)至一新管中,,加入5μl Annexin V-FITC和5-10 μl PI,,輕輕混勻,室溫避光孵育15min,。
2. 樣品檢測
1) 流式細胞儀檢測:
染色孵育后,,每管加入400μl 1×Binding Buffer工作液,混勻后使用流式細胞儀檢測(1小時內(nèi)檢測),。
建議設(shè)置經(jīng)凋亡誘導(dǎo)的正常細胞,、PI單染和Annexin V-FITC單染3個對照組,正常細胞組可作為熒光補償調(diào)節(jié)去除光譜重疊和設(shè)定十字門的位置,。結(jié)果可用CellQuest等軟件進行分析,,繪制雙色散點圖(two-color dot plot),F(xiàn)ITC為橫坐標,,PI為縱坐標,。Annexin V-FITC和PI聯(lián)合使用時,活細胞僅有很低強度的背景熒光,,早期凋亡細胞僅有較強的綠色熒光,,晚期凋亡細胞有綠色和紅色雙重?zé)晒狻?/span>
2) 熒光顯微鏡檢測:
染色孵育后涂片,顯微鏡下觀察,。使用熒光顯微鏡上的藍光和綠光通道分別觀察FITC和PI,。被Annexin V-FITC結(jié)合的細胞顯示漿膜上有綠色光環(huán)。喪失細胞膜完整性的細胞,,細胞核顯示紅色,,膜上有綠色光環(huán)。
烯霉鏈霉菌大鼠白介12Anti-STON1 Antibody人免疫球蛋白M(IgM)
淺絳紅鏈霉菌人抗乙型肝炎病核心IgM抗體Anti-STRADA Antibody人纖溶原激活物抑制因子1(PAI-1)
節(jié)桿菌屬大鼠血管內(nèi)皮生長因子BAnti-STRADA Antibody人纖溶原激活物抑制因子1(PAI-1)
釀酒酵母人抗乙型肝炎病表面抗體Anti-STRN Antibody人纖溶原激活物抑制因子(PAI)
平菇大鼠白介12Anti-STX1A Antibody人纖溶原激活物抑制因子(PAI)
釀酒酵母大鼠血管內(nèi)皮生長因子CAnti-STX2 Antibody人血纖蛋白原降解產(chǎn)物(FDP)
放射形根瘤菌人抗乙型肝炎病e抗體Anti-SUCNR1 Antibody人血纖蛋白原降解產(chǎn)物(FDP)
炭疽芽孢桿菌大鼠白介11Anti-SUGP2 Antibody人血栓調(diào)節(jié)蛋白(TM)
玉米黑粉菌人抗流行性出血熱病抗體IgMAnti-SUMO-3 Antibody人血栓調(diào)節(jié)蛋白(TM)
大腸埃希氏菌人抗狂犬病抗體Anti-SUMO1P1 Antibody人血小板衍生生長因子(PDGF)
浸麻類芽孢桿菌大鼠胰島樣生長因子結(jié)合蛋白4Anti-SUPT20H Antibody人血小板衍生生長因子(PDGF)
泡盛曲霉人抗甲型肝炎病IgM抗體Anti-SUMO2/3 Antibody人血小板活化因子(PAF)
畢赤酵母大鼠胰島樣生長因子結(jié)合蛋白3Anti-SV2C Antibody人血小板活化因子(PAF)
枯草芽孢桿菌大鼠血管內(nèi)皮生長因nti-SUPT3H Antibody人組織型纖溶原激活劑(t-PA)
李色鏈霉菌人抗甲型肝炎病IgG抗體Anti-SVOP Antibody人組織型纖溶原激活劑(t-PA)
根瘤菌屬人抗副流感病IgM抗體Anti-SURF1 Antibody人組織因子(TF)
血栓A2受體抗體大麗輪枝霉肌動蛋白結(jié)合蛋白1B單抗7
腱調(diào)蛋白抗體軟骨調(diào)節(jié)樣1蛋白亞炭角菌雜交瘤細胞CD25
四分子交聯(lián)體17抗體四旋蛋白大孢鏈格孢小鼠B淋巴細胞7
四分子交聯(lián)體15抗體四旋蛋白長柄鏈格孢(斜面)小鼠潘氏細胞雜交瘤
A3adenosine受體激動劑(2-Cl-IB-MECA)鹽古桿 油酸
紫棕炭團 鹽酸伊立替康
斐濟球腔 愈創(chuàng)木
壁節(jié)桿 氧化石蒜堿
甲速測試劑盒 鹽酸白屈菜紅堿
Achromobacter xylosoxidans subsp. xylosoxidans 銀杏酸
釀酒酵母 野菊花內(nèi)酯
三葉草根瘤 2-O-乙酰山椒子烯酮
大腸桿 柚皮-7-O-葡萄糖酸苷
鱗皮蘑菇 茵芋堿
彎頸霉屬 乙酰蝙蝠葛蘇林堿
異角狀盤多毛孢 一葉萩堿
米曲霉 蕓苔內(nèi)酯
番茄葉點* 乙酰黃芪皂苷I
黃色青霉 鹽酸去氫駱駝蓬堿