PKC抑制劑（CGP60474）公司*的產(chǎn)品：Caspase-1/FITC 熒光標(biāo)記天冬氨-胱氨特異性蛋白家族抗體IgG2,5-二氧肉桂 99%
Caspase-3/RBITC 紅色熒光羅丹明標(biāo)記(RBITC)Caspase-3 蛋白抗體(標(biāo)記抗體)3,5-二氧肉桂,，主要為反式 99%
Caspase-3 p17 subunit/FITC 熒光標(biāo)記Caspase-3 p17 subun

產(chǎn)品屬性：

中文名稱：PKC抑制劑（CGP60474）

英文名稱：CGP60474

產(chǎn)品規(guī)格：1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg|100mg

發(fā)貨周期：1～3天
公司產(chǎn)品僅用于科研

商品介紹：

細(xì)胞生物學(xué)研究有以下幾個(gè)方面：

細(xì)胞生物學(xué)的研究內(nèi)容十分廣泛,主要包括：

①細(xì)胞核,、染色體以及基因表達(dá)的研究；

②生物膜與細(xì)胞器的研究,；

③細(xì)胞骨架體系的研究,；

④細(xì)胞增殖及其調(diào)控；

⑤細(xì)胞分化及其調(diào)控,；

⑥細(xì)胞的衰老與編程性死亡(凋亡),；

⑦細(xì)胞的起源與進(jìn)化；

⑧細(xì)胞工程.

實(shí)驗(yàn)報(bào)告：

一,、分離與培養(yǎng)：

1,、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,，然后用PBS將此組織塊清洗2次,，最后將1mm3左右大??；

2,、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s,，置37℃條件下消化10min,，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清,，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置,；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液,，混懸10s,，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,，重復(fù)此步驟2-3次,，直至組織*被消化；

4,、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液,，1200r/min 離心10min，棄去上清,，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ,，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng),；

5、差速貼壁1h后,，吸出培養(yǎng)基,，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；

二,、免疫熒光鑒定：

1,、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時(shí)，棄去培養(yǎng)基,，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次,，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min,；

2,、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min,，然后在4℃條件下,，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3,、PBS沖洗細(xì)胞2次,，每次10min,，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min,；

4,、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜,；

5,、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min,，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗,， 37℃條件下放置1h；

6,、用PBS沖洗3次,，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照,。

馬葡萄球菌腦腸肽28Anti-DGKB Antibody人堿性成纖維生長因子4(bFGF-4)

瑟氏泰勒蟲（盧氏株-2）咬合蛋白抗原Anti-DGKD Antibody人堿性成纖維生長因子4(bFGF-4)

枯草芽孢桿菌胚胎干關(guān)鍵蛋白抗原Anti-DGKE Antibody人性成纖維生長因子1(aFGF-1)

糞腸球菌鳥脫羧抗原Anti-DGKI Antibody人性成纖維生長因子1(aFGF-1)

大腸埃希菌小腸結(jié)腸炎耶爾森氏菌膜通道蛋白抗原Anti-DGKH Antibody人凋亡相關(guān)因子配體(FASL)

玫瑰庫克氏菌嗅球蛋白1多肽抗原Anti-DGKB Antibody人凋亡相關(guān)因子配體(FASL)

杰丁畢赤酵母增食欲-A/欲激A抗原Anti-DGKZ Antibody人凋亡相關(guān)因子(FAS/CD95)

季也蒙有孢漢遜酵母縮宮受體Anti-DHPS Antibody人凋亡相關(guān)因子(FAS/CD95)

異常威克漢姆酵母食欲受體(多肽)Anti-DHPS Antibody人E選擇(E-Selectin/CD62E)

蘇云金芽孢桿菌蠟螟亞種增殖潛能相關(guān)蛋白抗原Anti-DGKK Antibody人E選擇(E-Selectin/CD62E)

費(fèi)雷生枝霉p19ARF抑癌基因抗原Anti-DHRS11 Antibody人嗜粒趨化蛋白Eotaxin 1(Eotaxin 1/CCL11)

乳酒假絲酵母磷化絲裂原活化蛋白激p38抗原Anti-DHRS4 Antibody人嗜粒趨化蛋白Eotaxin 1(Eotaxin 1/CCL11)

大腸埃希氏桿菌絲裂原活化蛋白激MKK3/6抗原Anti-DHX8 Antibody人鼠嗜粒趨化因子(ECF)

抗生鏈霉菌腫瘤抑制基因抗原（野生型P53）Anti-DHX8 Antibody人鼠嗜粒趨化因子(ECF)

糞腸球菌突變型P53抗原Anti-DIABLO Antibody人內(nèi)分泌腺來源的血管內(nèi)皮生長因子(EG-VEGF)

尖孢鐮刀菌野生型p53誘導(dǎo)基因1抗原Anti-DIAPH2 Antibody人內(nèi)分泌腺來源的血管內(nèi)皮生長因子(EG-VEGF)

ATP受體抗體匍枝根霉人前列腺增生細(xì)胞

磷脂酰肌激催化亞單位A抗體聚多曲霉（薩氏曲霉）人胚腎細(xì)胞

蛋白體激活因子PA28γ抗體鏈格孢小鼠結(jié)腸癌細(xì)胞

前列腺E2受體2抗體米根霉小鼠中腦多巴胺能神經(jīng)元細(xì)胞
PKC抑制劑（CGP60474）釀酒酵母 陶塔二

圓弧青霉 Tomentin

粗皮側(cè)耳（平菇） Tirotundin

貝萊斯芽胞桿 蘇式-1-C-丁香基三

米根霉 threo-1-(4-Hydroxy- 3-methoxyphe

煙色離褶傘 五乙酸紫丁香甙酯

紫產(chǎn)色鏈霉直絲變種 豆甾-5,8-二烯-3-

亞膜漢遜酵母 Stigmast-4-ene-3β,6β-diol

長白山近藤氏酵母 Sorghumol acetate

中國臺(tái)灣根霉 軟脂酸谷甾酯

炭角* Sinensin

殺鮭氣單胞 芥子配糖物

*豬苓 Simiarenol acetate

芬氏鏈霉 Sendanolactone

毛柄(金針菇) 幼枝含斷氧化馬錢子甙 

操作規(guī)程

1,、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔，通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升2000個(gè)細(xì)胞,，細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升5000～10000個(gè)細(xì)胞（具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目,，需根據(jù)細(xì)胞的大小，細(xì)胞增殖速度的快慢等決定）,。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí).

2,、.加入適當(dāng)濃度的0～10μL 受試化合物。

3,、將96孔板在37℃,，含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時(shí)間。

4,、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液,。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液,，在37℃孵育4小時(shí),，使MTT 還原為甲臜。

6,、吸出上清液,，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻,。

7,、酶標(biāo)儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度（如無570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）,。

8,、結(jié)果分析

a,、細(xì)胞的存活率：將各測試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT，無細(xì)胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT,，無細(xì)胞），各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD,。細(xì)胞的存活率以T/C%表示,，T 為加藥細(xì)胞的OD 值，C 為對照細(xì)胞的OD 值,。細(xì)胞存活率% =（加藥細(xì)胞OD/對照細(xì)胞OD）×100

b,、求出T/C = 50% 時(shí)的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時(shí)的藥物濃度(IC90)