以下是細胞生物學試劑的詳細介紹:
公司產(chǎn)品僅用于科研細胞培養(yǎng)操作規(guī)程:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備:
1)準備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO),90%;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,,10%,。
2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%,;二氧化碳,,5%。 溫度:37℃,,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%,。
3)凍存液:90%血清,10%DMSO,,現(xiàn)用現(xiàn)配,,液氮儲存。
二.細胞處理:
1)復蘇細胞:將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,,移入事先準備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻,。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻,。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細胞密度,。
2)細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,,即可進行傳代培養(yǎng)。
對于懸浮細胞,,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細胞,,1000RPM,常溫條件下離心5分鐘,,棄去上清液,,補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,,將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
商品介紹:
MMAD是一種有效的微管(tubulin)抑制劑,,是抗體藥物偶聯(lián)物(ADCs)中的活性分子,。 注:本品僅可用于科研實驗,嚴禁用于臨床醫(yī)療及其他用途,! CAS號:203849-91-6 別名:Demethyldolastatin 10;Monomethylauristatin D;Monomethyl Dolastatin 10 純度:99.28% 分子量:771.06 儲存條件:-20℃,,有效期2年,溶入溶劑后-20℃請盡量在一個月內(nèi)使用,。 |
操作步驟:
1. 樣品染色
1) 將Binding Buffer(10×)稀釋成1×Binding buffer工作液備用(1ml Binding Buffer(10×)需加入9ml無菌去離子水),。
2) 對于懸浮細胞,500-1000g離心5min收集細胞,。
對于貼壁細胞,,要用不含EDTA的胰酶消化細胞,胰酶消化時間不宜過長或過短,,最好是在輕輕吹打可以使貼壁細胞吹打下來時,,加入細胞培養(yǎng)液,將細胞輕輕吹打下來,,轉(zhuǎn)移到離心管內(nèi),,500-1000g離心5min收集細胞。
3) 收集細胞后,,加入預冷PBS溶液輕搖或用移液器輕柔吹打洗滌,,離心收集細胞,共洗滌兩次,。
4) 在細胞沉淀中加入1×Binding buffer工作液,,重懸細胞,使細胞濃度達到1×106 cell/ml,。
5) 吸取100μl細胞懸液(細胞總數(shù)為1×105 cell)至一新管中,,加入5μl Annexin V-FITC和5-10 μl PI,輕輕混勻,,室溫避光孵育15min,。
2. 樣品檢測
1) 流式細胞儀檢測:
染色孵育后,每管加入400μl 1×Binding Buffer工作液,,混勻后使用流式細胞儀檢測(1小時內(nèi)檢測),。
建議設(shè)置經(jīng)凋亡誘導的正常細胞、PI單染和Annexin V-FITC單染3個對照組,,正常細胞組可作為熒光補償調(diào)節(jié)去除光譜重疊和設(shè)定十字門的位置。結(jié)果可用CellQuest等軟件進行分析,,繪制雙色散點圖(two-color dot plot),,F(xiàn)ITC為橫坐標,,PI為縱坐標。Annexin V-FITC和PI聯(lián)合使用時,,活細胞僅有很低強度的背景熒光,,早期凋亡細胞僅有較強的綠色熒光,晚期凋亡細胞有綠色和紅色雙重熒光,。
2) 熒光顯微鏡檢測:
染色孵育后涂片,,顯微鏡下觀察。使用熒光顯微鏡上的藍光和綠光通道分別觀察FITC和PI,。被Annexin V-FITC結(jié)合的細胞顯示漿膜上有綠色光環(huán),。喪失細胞膜完整性的細胞,細胞核顯示紅色,,膜上有綠色光環(huán),。
腐皮鐮孢菌小鼠CD19分子Anti-MEGF9 Antibody人血栓B2(TXB2)
果生鏈核盤菌人糖基化依賴的黏附分子Anti-MED27 Antibody人血栓B2(TXB2)
泡盛曲霉大鼠成纖維生長因子10Anti-MED26 Antibody人皮質(zhì)/腎上腺(CORT)
長裙竹蓀兔子纖溶原Anti-MEGF9 Antibody人皮質(zhì)/腎上腺(CORT)
阿班假絲酵母白蛋白(夾心法一步法)Anti-MEGF8 Antibody人前列腺E2(PGE2)
匍枝根霉(黑根霉)抗-HAV IgM(夾心法 一步法) Anti-MELK Antibody人前列腺E2(PGE2)
靈芝(紅芝, 赤芝)抗-HAV (總)競爭法一步法Anti-MEOX2 Antibody人雙氫睪(DHT)
離生青霉抗抗體 IgG(間接法二步法) Anti-MET Antibody人雙氫睪(DHT)
日本色鹽桿菌抗抗體 IgM(間接法二步法)Anti-Mevalonate Kinase Antibody人促生長激釋放激(GHRH)
侵染鏈格孢大鼠分泌型磷脂A2Anti-MFAP5 Antibody人促生長激釋放激(GHRH)
谷棒桿菌兔骨形成蛋白Anti-MIA Antibody人雌激(E)
季也蒙假絲酵母人干擾調(diào)節(jié)因子Anti-MGST3 Antibody人雌激(E)
乳明串珠菌鯉魚卵黃蛋白原Anti-MGST2 Antibody人孕激/孕(PROG)
尼氏芽孢桿菌小鼠CD3分子Anti-MIA2 Antibody人孕激/孕(PROG)
樹舌4-1魚類促性腺激釋放激Anti-MIA Antibody人超敏游離雌三(uE3)
產(chǎn)二鏈霉菌兔骨保護Anti-MID1 Antibody人超敏游離雌三(uE3)
神經(jīng)元突觸膜結(jié)合蛋白2抗體凝結(jié)芽胞桿菌人絨癌細胞
神經(jīng)元突觸膜胞外分泌調(diào)節(jié)蛋白3抗體矢野鞘菌小鼠睪丸畸胎瘤細胞
神經(jīng)元突觸膜胞外分泌調(diào)節(jié)蛋白4抗體球形芽孢桿菌人甲狀腺癌細胞C643(干細胞庫保藏)
環(huán)指蛋白39抗體嗜麥芽糖寡養(yǎng)單胞菌人甲狀腺癌細胞CAL-62(干細胞庫保藏)
微管(tubulin)抑制劑(MMAD)細孢毛霉 5,7,4'-Tri-O-methylaromadendrin
暗孢小克銀漢霉 5,6,7,8-四甲氧基
淺灰白鏈霉 4β-Carboxy-19-nortotarol
桑葉盤孢 4-Oxobedfordiaic acid
木蘭假絲酵母 4'-O-Methyltaxifolin
傳染性支氣管炎病 4-O-沒食子酰巖白菜
異常漢遜酵母 4,9-Dihydroxy-alpha-lapachone
香菇 4',7-Di-O-methylnaringenin
根瘤屬 4-(3,4-二甲氧基苯基)-T-3-烯-1-
金黃1號(金針菇) 3β-Hydroxyurs-11-en-28,13-olide
白干皮孔 3-Isomangostin hydrate
土生叢毛單胞 3-Prenyl-2,4,6-trihydroxybenzoph
腸炎沙門氏 3-O-Methylducheside A
需鈉弧 3-O-Caffeoyloleanolic acid
罕見沃特斯氏 3''-O-甲基香豌豆苷元