以下是細(xì)胞生物學(xué)試劑的詳細(xì)介紹:
公司產(chǎn)品僅用于科研細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:
1)準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO),90%,;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%,。
2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,,95%;二氧化碳,,5%,。 溫度:37℃,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%,。
3)凍存液:90%血清,,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配,,液氮儲(chǔ)存,。
二.細(xì)胞處理:
1)復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,,移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,,棄去上清液,,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過(guò)夜,。第二天換液并檢查細(xì)胞密度,。
2)細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng),。
對(duì)于懸浮細(xì)胞,,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細(xì)胞,1000RPM,,常溫條件下離心5分鐘,,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,,將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中,。
商品介紹:
TMC353121是一種有效的呼吸道合胞病毒(RSV)融合抑制劑,pEC50為9.9,。 注:本品僅可用于科研實(shí)驗(yàn),,嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途! CAS號(hào):857066-90-1 純度:97.71% 分子量:558.71 儲(chǔ)存條件:-20℃,,有效期2年,,溶入溶劑后-20℃請(qǐng)盡量在一個(gè)月內(nèi)使用。 |
操作步驟:
1. 樣品染色
1) 將Binding Buffer(10×)稀釋成1×Binding buffer工作液備用(1ml Binding Buffer(10×)需加入9ml無(wú)菌去離子水),。
2) 對(duì)于懸浮細(xì)胞,,500-1000g離心5min收集細(xì)胞。
對(duì)于貼壁細(xì)胞,,要用不含EDTA的胰酶消化細(xì)胞,,胰酶消化時(shí)間不宜過(guò)長(zhǎng)或過(guò)短,最好是在輕輕吹打可以使貼壁細(xì)胞吹打下來(lái)時(shí),,加入細(xì)胞培養(yǎng)液,,將細(xì)胞輕輕吹打下來(lái),轉(zhuǎn)移到離心管內(nèi),,500-1000g離心5min收集細(xì)胞,。
3) 收集細(xì)胞后,加入預(yù)冷PBS溶液輕搖或用移液器輕柔吹打洗滌,,離心收集細(xì)胞,,共洗滌兩次,。
4) 在細(xì)胞沉淀中加入1×Binding buffer工作液,,重懸細(xì)胞,使細(xì)胞濃度達(dá)到1×106 cell/ml。
5) 吸取100μl細(xì)胞懸液(細(xì)胞總數(shù)為1×105 cell)至一新管中,,加入5μl Annexin V-FITC和5-10 μl PI,,輕輕混勻,室溫避光孵育15min,。
2. 樣品檢測(cè)
1) 流式細(xì)胞儀檢測(cè):
染色孵育后,,每管加入400μl 1×Binding Buffer工作液,混勻后使用流式細(xì)胞儀檢測(cè)(1小時(shí)內(nèi)檢測(cè)),。
建議設(shè)置經(jīng)凋亡誘導(dǎo)的正常細(xì)胞,、PI單染和Annexin V-FITC單染3個(gè)對(duì)照組,正常細(xì)胞組可作為熒光補(bǔ)償調(diào)節(jié)去除光譜重疊和設(shè)定十字門的位置,。結(jié)果可用CellQuest等軟件進(jìn)行分析,,繪制雙色散點(diǎn)圖(two-color dot plot),F(xiàn)ITC為橫坐標(biāo),,PI為縱坐標(biāo),。Annexin V-FITC和PI聯(lián)合使用時(shí),活細(xì)胞僅有很低強(qiáng)度的背景熒光,,早期凋亡細(xì)胞僅有較強(qiáng)的綠色熒光,,晚期凋亡細(xì)胞有綠色和紅色雙重?zé)晒狻?/span>
2) 熒光顯微鏡檢測(cè):
染色孵育后涂片,顯微鏡下觀察,。使用熒光顯微鏡上的藍(lán)光和綠光通道分別觀察FITC和PI,。被Annexin V-FITC結(jié)合的細(xì)胞顯示漿膜上有綠色光環(huán)。喪失細(xì)胞膜完整性的細(xì)胞,,細(xì)胞核顯示紅色,,膜上有綠色光環(huán)。
雞蛋花(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Diethylene glycolG蛋白偶聯(lián)受體171抗體包裝100mg
雞冠花(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Diethylene glycol神經(jīng)膜糖蛋白M6b包裝25mg
雞內(nèi)金(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: 1-Dodecanol鳥(niǎo)苷激GMK抗體包裝500mg
雞矢藤(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: DIRECT BLUE 6半乳糖腦苷脂抗體包裝25ml
雞血藤(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Disperse Orange 37G蛋白偶聯(lián)受體激5抗體包裝100mg
雞眼睛(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Diethyltin-dichlorideGTP結(jié)合蛋白R(shí)EM1抗體包裝500mg
積雪草(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Napropamid磷化糖原合激-3α抗體包裝1g
積雪草苷B英文名稱: Diflubenzuron solution生長(zhǎng)分化因子7抗體包裝1g
積雪草苷(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Dithianon葡萄糖激調(diào)節(jié)蛋白抗體包裝5g
積雪草(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Dazometγ谷酰半胱合成抗體(γ-GCSc)包裝100g
吉馬(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: DichloropheneGCOM1蛋白抗體包裝25g
吉祥草(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Dipropetryn葡萄糖果糖還原2抗體包裝5g
急性子(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: [3-(3,5-Dichlorophenyl)-2,4-dioxoimidazolidinyl]-N-(methylethyl)carboxamide standard solution膠質(zhì)系源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子受體α1樣蛋白抗體包裝25g
蒺藜(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: DicapthonGHDC蛋白抗體包裝5g
蒺藜皂苷D英文名稱: p, p’-DDD甘油激5抗體包裝25g
蒼白桿菌Ochrobactrum│pituitosum Huber et al. 質(zhì)量規(guī)格:>98%,進(jìn)分固試劑盒歐當(dāng)歸內(nèi)酯A;Levistilide A
雞傷寒沙門氏菌Salmonella│gallinarum 質(zhì)量規(guī)格:>99%,BR去乙?;疭irtuin-7試劑盒歐前胡;Imperatorin
黑孢屬菌種Nigrospora│sp. 質(zhì)量規(guī)格:>99%去乙?;疭irtuin-6試劑盒尼泊金異酯;Isopropyl 4-H
RSV融合抑制劑(TMC353121)煙酰腺嘌呤二核苷1抗體戰(zhàn)骨(標(biāo)準(zhǔn)品) 4-FLUOROCINNAMONITRILE
一氧化氮合成-1抗體(神經(jīng)型)獐牙菜苷(標(biāo)準(zhǔn)品) Hydroxylammonium chloride
轉(zhuǎn)錄因子相關(guān)蛋白NKX6.1抗體獐牙菜苦苷(標(biāo)準(zhǔn)品) DICYCLOMINE HYDROCHLORIDE
造血蛋白1抗體樟腦(標(biāo)準(zhǔn)品) 2-Pyridinealdoxime methochloride
骨巢蛋白抗體掌葉防已;巴馬汀,,黃藤,;(標(biāo)準(zhǔn)品) CYPROHEPTADINE HYDROCHLORIDE
NUP54抗體柘木(標(biāo)準(zhǔn)品) Amidopyrine/aminopyrine
親核β1抗體浙貝母(標(biāo)準(zhǔn)品) Thalidomide
谷受體NMDAζ1抗體鷓鴣菜(標(biāo)準(zhǔn)品) BENACTYZINE HYDROCHLORIDE
谷受體NMDAζ2抗體珍珠(標(biāo)準(zhǔn)品) Antipyrine