商品介紹:
BIX02189是MEK5/ERK5選擇性抑制劑,,IC50為59nM。 注:本品僅可用于科研實(shí)驗(yàn),,嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途,! CAS號:1265916-41-3 純度:99.65% 分子量:440.54 儲存條件:-20℃,,有效期2年,,溶入溶劑后-20℃請盡量在一個(gè)月內(nèi)使用。 |
以下是細(xì)胞生物學(xué)試劑的詳細(xì)介紹:
操作步驟:
1. 樣品染色
1) 將Binding Buffer(10×)稀釋成1×Binding buffer工作液備用(1ml Binding Buffer(10×)需加入9ml無菌去離子水),。
2) 對于懸浮細(xì)胞,,500-1000g離心5min收集細(xì)胞。
對于貼壁細(xì)胞,,要用不含EDTA的胰酶消化細(xì)胞,,胰酶消化時(shí)間不宜過長或過短,最好是在輕輕吹打可以使貼壁細(xì)胞吹打下來時(shí),,加入細(xì)胞培養(yǎng)液,,將細(xì)胞輕輕吹打下來,轉(zhuǎn)移到離心管內(nèi),,500-1000g離心5min收集細(xì)胞,。
3) 收集細(xì)胞后,加入預(yù)冷PBS溶液輕搖或用移液器輕柔吹打洗滌,,離心收集細(xì)胞,,共洗滌兩次。
4) 在細(xì)胞沉淀中加入1×Binding buffer工作液,,重懸細(xì)胞,,使細(xì)胞濃度達(dá)到1×106 cell/ml。
5) 吸取100μl細(xì)胞懸液(細(xì)胞總數(shù)為1×105 cell)至一新管中,,加入5μl Annexin V-FITC和5-10 μl PI,,輕輕混勻,室溫避光孵育15min,。
2. 樣品檢測
1) 流式細(xì)胞儀檢測:
染色孵育后,,每管加入400μl 1×Binding Buffer工作液,混勻后使用流式細(xì)胞儀檢測(1小時(shí)內(nèi)檢測),。
建議設(shè)置經(jīng)凋亡誘導(dǎo)的正常細(xì)胞,、PI單染和Annexin V-FITC單染3個(gè)對照組,正常細(xì)胞組可作為熒光補(bǔ)償調(diào)節(jié)去除光譜重疊和設(shè)定十字門的位置,。結(jié)果可用CellQuest等軟件進(jìn)行分析,,繪制雙色散點(diǎn)圖(two-color dot plot),F(xiàn)ITC為橫坐標(biāo),,PI為縱坐標(biāo),。Annexin V-FITC和PI聯(lián)合使用時(shí),活細(xì)胞僅有很低強(qiáng)度的背景熒光,,早期凋亡細(xì)胞僅有較強(qiáng)的綠色熒光,,晚期凋亡細(xì)胞有綠色和紅色雙重?zé)晒狻?/span>
2) 熒光顯微鏡檢測:
染色孵育后涂片,顯微鏡下觀察,。使用熒光顯微鏡上的藍(lán)光和綠光通道分別觀察FITC和PI,。被Annexin V-FITC結(jié)合的細(xì)胞顯示漿膜上有綠色光環(huán)。喪失細(xì)胞膜完整性的細(xì)胞,,細(xì)胞核顯示紅色,,膜上有綠色光環(huán)。
公司產(chǎn)品僅用于科研細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:
1)準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO),,90%,;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%,。
2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,,95%,;二氧化碳,5%,。 溫度:37℃,,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%血清,,10%DMSO,,現(xiàn)用現(xiàn)配,液氮儲存,。
二.細(xì)胞處理:
1)復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,,移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,,棄去上清液,,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜,。第二天換液并檢查細(xì)胞密度,。
2)細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng),。
對于懸浮細(xì)胞,,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細(xì)胞,1000RPM,,常溫條件下離心5分鐘,,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,,將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中,。
阿穆爾斯克灣鹽地桿菌人α淀粉Bacillus cereus小鼠血管生成4(ANG-4)
黑腐皮殼菌人堿性磷Bacillus cereus小鼠骨成型蛋白受體Ⅱ(BMPR-Ⅱ)
核黃氧化德沃斯氏菌人天青殺Bacillus cereus小鼠骨成型蛋白受體Ⅱ(BMPR-Ⅱ)
蕈狀芽孢桿菌人血管緊張肽ABacillus cereus小鼠主要組織相容性復(fù)合體Ⅲ類(MHC-Ⅲ/H-2Ⅲ)
膠紅酵母人胰淀粉Bacillus cereus小鼠主要組織相容性復(fù)合體Ⅲ類(MHC-Ⅲ/H-2Ⅲ)
牛輪狀病(可訂購)人α烯化Bacillus cereus小鼠E鈣粘著蛋白/上皮性鈣黏附蛋白(E-Cad)
蠟狀芽孢桿菌人膠原IIBacillus cereus小鼠E鈣粘著蛋白/上皮性鈣黏附蛋白(E-Cad)
冷海水黃桿菌人膠原IBacillus cereus小鼠CD30分子(CD30)
短芽孢桿菌人磷化蛋白激CBacillus cereus小鼠CD30分子(CD30)
毛殼人磷化外信號調(diào)節(jié)激Bacillus cereus小鼠主要組織相容性復(fù)合體Ⅱ類(MHC-Ⅱ/H-2Ⅱ
黑曲霉人乙酰酯Bacillus cereus小鼠主要組織相容性復(fù)合體Ⅱ類(MHC-Ⅱ/H-2Ⅱ
Brevibacillus parabrevis人葡萄糖氧化Bacillus cereus小鼠可溶性血管內(nèi)皮蛋白C受體(sEPCR)
克魯斯假絲酵母人酪羥化Bacillus cereus小鼠可溶性血管內(nèi)皮蛋白C受體(sEPCR)
紅托竹蓀人多巴脫羧Bacillus cereus小鼠嗜粒趨化因子(ECF)
硬結(jié)節(jié)桿菌人神經(jīng)元性烯化Bacillus cereus小鼠嗜粒趨化因子(ECF)
伯克霍爾德氏菌人多巴-β羥化Bacillus cereus小鼠嗜粒趨化蛋白Eotaxin 1(Eotaxin 1/CCL11)
WD重復(fù)蛋白16抗體蠶蛹1號小鼠肝細(xì)胞AML12(干細(xì)胞庫保藏)
WW結(jié)構(gòu)域E3泛連接1抗體平菇2000(京瑞)大耳山羊肺細(xì)胞
乙型肝炎X相關(guān)蛋白2抗體PL20(雙抗黑平)正常小鼠睪丸Sertoli細(xì)胞
X射線修復(fù)交叉互補(bǔ)蛋白4抗體嗜熱側(cè)孢霉昆蟲細(xì)胞
MEK5/ERK5抑制劑(BIX02189)膠紅酵母 甘草酸二
運(yùn)動(dòng)節(jié)桿 偶氮膦Ⅰ
擬莖點(diǎn)霉 甘草苷元-7-O-D-芹糖-4'-O-D-葡萄糖苷
Brevibacillus 堿藍(lán)6B
沃氏葡萄球 根薯酮內(nèi)酯B
杏鮑菇 酸性茜藍(lán)B
Lysobacter soli 根薯酮內(nèi)酯A
焦曲霉 茜黃R鈉鹽
嗜根考克氏 茜黃R
芽孢桿屬 骨化二
枯草芽孢桿 茜黃GG
巨型艾耳球蟲 鬼臼-4-O-葡萄糖苷
粟粒皮禿馬勃 茜紫3B
肉色鏈孢囊 戈米辛G
紫色紅曲霉 光翠雀堿