以下是細胞生物學試劑的詳細介紹:
公司產(chǎn)品僅用于科研細胞培養(yǎng)操作規(guī)程:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備:
1)準備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO),,90%,;優(yōu)質胎牛血清,10%,。
2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,,95%;二氧化碳,5%,。 溫度:37℃,,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%血清,,10%DMSO,,現(xiàn)用現(xiàn)配,液氮儲存,。
二.細胞處理:
1)復蘇細胞:將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,,移入事先準備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,,棄去上清液,,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜,。第二天換液并檢查細胞密度,。
2)細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養(yǎng),。
對于懸浮細胞,,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細胞,1000RPM,,常溫條件下離心5分鐘,,棄去上清液,補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,,將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中,。
商品介紹:
MI2是MALT1的不可逆抑制劑,在ABCDLBCL細胞增殖抑制實驗中IC50為5.84uM,。 注:本品僅可用于科研實驗,,嚴禁用于臨床醫(yī)療及其他用途! CAS號:1047953-91-2 別名:MI2 純度:99.66% 分子量:455.72 儲存條件:-20℃,,有效期2年,,溶入溶劑后-20℃請盡量在一個月內使用。 |
操作步驟:
1. 樣品染色
1) 將Binding Buffer(10×)稀釋成1×Binding buffer工作液備用(1ml Binding Buffer(10×)需加入9ml無菌去離子水),。
2) 對于懸浮細胞,,500-1000g離心5min收集細胞。
對于貼壁細胞,,要用不含EDTA的胰酶消化細胞,,胰酶消化時間不宜過長或過短,最好是在輕輕吹打可以使貼壁細胞吹打下來時,,加入細胞培養(yǎng)液,,將細胞輕輕吹打下來,轉移到離心管內,500-1000g離心5min收集細胞,。
3) 收集細胞后,,加入預冷PBS溶液輕搖或用移液器輕柔吹打洗滌,離心收集細胞,,共洗滌兩次,。
4) 在細胞沉淀中加入1×Binding buffer工作液,重懸細胞,,使細胞濃度達到1×106 cell/ml,。
5) 吸取100μl細胞懸液(細胞總數(shù)為1×105 cell)至一新管中,加入5μl Annexin V-FITC和5-10 μl PI,,輕輕混勻,,室溫避光孵育15min。
2. 樣品檢測
1) 流式細胞儀檢測:
染色孵育后,,每管加入400μl 1×Binding Buffer工作液,,混勻后使用流式細胞儀檢測(1小時內檢測)。
建議設置經(jīng)凋亡誘導的正常細胞,、PI單染和Annexin V-FITC單染3個對照組,,正常細胞組可作為熒光補償調節(jié)去除光譜重疊和設定十字門的位置。結果可用CellQuest等軟件進行分析,,繪制雙色散點圖(two-color dot plot),,F(xiàn)ITC為橫坐標,PI為縱坐標,。Annexin V-FITC和PI聯(lián)合使用時,,活細胞僅有很低強度的背景熒光,早期凋亡細胞僅有較強的綠色熒光,,晚期凋亡細胞有綠色和紅色雙重熒光,。
2) 熒光顯微鏡檢測:
染色孵育后涂片,顯微鏡下觀察,。使用熒光顯微鏡上的藍光和綠光通道分別觀察FITC和PI。被Annexin V-FITC結合的細胞顯示漿膜上有綠色光環(huán),。喪失細胞膜完整性的細胞,,細胞核顯示紅色,膜上有綠色光環(huán),。
氈毛栓孔菌臺盼藍染色液Escherichia coli小鼠膽囊收縮/腸促胰肽(CCK)
溫特曲霉臺盼藍Escherichia coli小鼠腦腸肽(BGP/Gehrelin)
腐皮鐮孢菌甲藍Escherichia coli小鼠腦腸肽(BGP/Gehrelin)
芍藥枝孢霉菌Escherichia coli小鼠6前列腺(6-K-PG)
木耳麗春紅SEscherichia coli小鼠6前列腺(6-K-PG)
銀耳異硫氫熒光Escherichia coli小鼠載脂蛋白A1(apo-A1)
黃疣倫茨氏菌對磷二鈉Escherichia coli小鼠載脂蛋白A1(apo-A1)
松木層孔菌噻唑蘭Escherichia coli小鼠載脂蛋白B100(apo-B100)
Arthrobacter鄰二Escherichia coli小鼠載脂蛋白B100(apo-B100)
礦泉水 鉛烯酰Escherichia coli小鼠25羥基維生D3(25(OH)D3/25 HVD3)
澳型核果褐腐病菌活化生物Escherichia coli小鼠25羥基維生D3(25(OH)D3/25 HVD3)
毛木耳堿性磷顯色試劑盒Escherichia coli小鼠Ⅲ型前膠原肽(PⅢNP)
赤曲霉BCA蛋白濃度測定試劑盒Escherichia coli小鼠Ⅲ型前膠原肽(PⅢNP)
菌核青霉BCA蛋白濃度測定試劑盒Escherichia coli小鼠維生C(VC)
枯草芽胞桿菌枯草亞種BCA蛋白濃度測定試劑盒Escherichia coli小鼠維生C(VC)
畢赤酵母屬考馬斯亮藍快速染色液Escherichia coli小鼠Ⅱ型膠原(Col Ⅱ)
核蛋白p8抗體柱彎孢昆明白小鼠胚胎成纖維細胞(干細胞庫保藏)
型肝炎NS4B65kDa抗體緣彎孢狗腎細胞突型
神經(jīng)纖毛蛋白1抗體瓜類大鼠嗜堿性粒細胞性白血病細胞
神經(jīng)營養(yǎng)因子-3前蛋白抗體蔥抗精核蛋白
MALT1抑制劑(MI 2 MALT1 inhibitor)堅強芽孢桿 馬兜鈴酸B
鹽水球形 馬兜鈴酸A
黃曲霉 酯蟾配基
羊無漿體(湟源株) 華蟾酥基
(可訂)大腸埃希氏OP50 木蘭脂
寒研所芽孢桿 異水飛薊賓
哈茨木霉 水飛薊寧
大斑凸臍蠕孢 水飛薊
澳型核果褐腐病 莪術烯
諾爾氏屬 人參皂苷Rk2
釀酒酵母 葫蘆巴堿
枯草芽胞桿 蘋果酸
枝芽胞 琥珀酸
香菇18 乙酰水楊酸
嗜鹽芽孢桿 水楊酸