商品介紹:
MTS細(xì)胞增殖與毒性檢測(cè)試劑盒是應(yīng)用新型的水溶性甲臢化合物[3-(4,5-二甲基噻唑-2-基)-5-(3-羧甲酯基)-2-(4-磺苯基)-2H-四唑(金翁),,內(nèi)鹽,;MTS]快速高靈敏度檢測(cè)細(xì)胞增殖和細(xì)胞毒性的比色檢測(cè)產(chǎn)品。 MTS被細(xì)胞生物還原成一種可溶于組織培養(yǎng)基的甲臢化合物,,新陳代謝活躍的活細(xì)胞內(nèi)的脫氫酶類將MTS轉(zhuǎn)化成液態(tài)可溶的甲臢化合物,,這種甲臢化合物在490nm的吸收值可以直接在96孔板上測(cè)量,而不需要另外作處理,。由490nm測(cè)量的吸收值所表示的甲臢產(chǎn)物的數(shù)量與培養(yǎng)物中活性細(xì)胞的數(shù)量成正比,。細(xì)胞增殖越多越快,則顏色越深,;細(xì)胞毒性越大,,則顏色越淺。對(duì)于同樣的細(xì)胞,,顏色的深淺和細(xì)胞數(shù)量呈線性關(guān)系,。 MTS溶液可以直接加入到細(xì)胞樣品中,不需要預(yù)配各種成分,,MTS溶液很穩(wěn)定,,對(duì)細(xì)胞沒有毒性,可以長(zhǎng)時(shí)間孵育細(xì)胞,。MTS法測(cè)定細(xì)胞增殖或毒性試驗(yàn)中活細(xì)胞數(shù)目的靈敏度高,,無放射性,檢測(cè)細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)的靈敏度比其它方法如MTT,XTT和WST-1高,。 儲(chǔ)存條件:2-8℃避光保存,。長(zhǎng)期不用的分裝后于-20℃避光保存,,避免反復(fù)凍融。 有效期:一年,。 |
以下是細(xì)胞生物學(xué)試劑的詳細(xì)介紹:
操作步驟:
1. 樣品染色
1) 將Binding Buffer(10×)稀釋成1×Binding buffer工作液備用(1ml Binding Buffer(10×)需加入9ml無菌去離子水),。
2) 對(duì)于懸浮細(xì)胞,500-1000g離心5min收集細(xì)胞,。
對(duì)于貼壁細(xì)胞,,要用不含EDTA的胰酶消化細(xì)胞,胰酶消化時(shí)間不宜過長(zhǎng)或過短,,最好是在輕輕吹打可以使貼壁細(xì)胞吹打下來時(shí),,加入細(xì)胞培養(yǎng)液,將細(xì)胞輕輕吹打下來,,轉(zhuǎn)移到離心管內(nèi),,500-1000g離心5min收集細(xì)胞。
3) 收集細(xì)胞后,,加入預(yù)冷PBS溶液輕搖或用移液器輕柔吹打洗滌,,離心收集細(xì)胞,共洗滌兩次,。
4) 在細(xì)胞沉淀中加入1×Binding buffer工作液,,重懸細(xì)胞,使細(xì)胞濃度達(dá)到1×106 cell/ml,。
5) 吸取100μl細(xì)胞懸液(細(xì)胞總數(shù)為1×105 cell)至一新管中,加入5μl Annexin V-FITC和5-10 μl PI,,輕輕混勻,,室溫避光孵育15min。
2. 樣品檢測(cè)
1) 流式細(xì)胞儀檢測(cè):
染色孵育后,,每管加入400μl 1×Binding Buffer工作液,,混勻后使用流式細(xì)胞儀檢測(cè)(1小時(shí)內(nèi)檢測(cè))。
建議設(shè)置經(jīng)凋亡誘導(dǎo)的正常細(xì)胞,、PI單染和Annexin V-FITC單染3個(gè)對(duì)照組,,正常細(xì)胞組可作為熒光補(bǔ)償調(diào)節(jié)去除光譜重疊和設(shè)定十字門的位置。結(jié)果可用CellQuest等軟件進(jìn)行分析,,繪制雙色散點(diǎn)圖(two-color dot plot),,F(xiàn)ITC為橫坐標(biāo),PI為縱坐標(biāo),。Annexin V-FITC和PI聯(lián)合使用時(shí),,活細(xì)胞僅有很低強(qiáng)度的背景熒光,早期凋亡細(xì)胞僅有較強(qiáng)的綠色熒光,,晚期凋亡細(xì)胞有綠色和紅色雙重?zé)晒狻?/span>
2) 熒光顯微鏡檢測(cè):
染色孵育后涂片,,顯微鏡下觀察,。使用熒光顯微鏡上的藍(lán)光和綠光通道分別觀察FITC和PI。被Annexin V-FITC結(jié)合的細(xì)胞顯示漿膜上有綠色光環(huán),。喪失細(xì)胞膜完整性的細(xì)胞,,細(xì)胞核顯示紅色,膜上有綠色光環(huán),。
公司產(chǎn)品僅用于科研細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:
1)準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO),,90%;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,,10%,。
2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%,;二氧化碳,,5%。 溫度:37℃,,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%,。
3)凍存液:90%血清,10%DMSO,,現(xiàn)用現(xiàn)配,,液氮儲(chǔ)存。
二.細(xì)胞處理:
1)復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,,移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻,。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻,。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度,。
2)細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對(duì)于懸浮細(xì)胞,,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細(xì)胞,,1000RPM,常溫條件下離心5分鐘,,棄去上清液,,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中,。
Finasteride(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Torasemide豬瘟病抗體包裝1g
Fludrocortisone acetate(標(biāo)準(zhǔn)品...英文名稱: Travoprost嗜鉻粒蛋白C抗體包裝5g
Flumethasone(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Trazodone HCl煙堿型乙酰受體α10/AChRα10抗體包裝5g
Fluocinolone Acetonide(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Trazodone HCl煙堿型乙酰受體α6/AChRα6抗體包裝5MG
Fluorometholone(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Trilostane煙堿型乙酰受體α9/AChRα9抗體包裝1g
Fluticasone Propionate(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Trilostane煙堿型乙酰受體δ/AChRδ抗體包裝5g
Gefitinib(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Triptorelin Acetate凋亡加強(qiáng)結(jié)構(gòu)域蛋白8抗體包裝1g
Gemcitabine HCl(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Vancomycin HCl凋亡加強(qiáng)結(jié)構(gòu)域蛋白7抗體包裝5g
Gestodene(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Vancomycin HClβ衣被蛋白抗體包裝100mg
Hexestrol(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Vandetanib 半胱蛋白4/11抗體包裝1g
Hydrocortisone(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Varenicline Tartrate1號(hào)染色體開放閱讀框187抗體包裝1g
Hydroxyprogesterone caproat...英文名稱: Varenicline Tartrate9號(hào)染色體開放閱讀框61抗體包裝5g
L-(-)-葡萄糖(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Vinorelbine TartrateC末端結(jié)合蛋白2抗體包裝25g
L-半胱(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Vinorelbine Tartrate21號(hào)染色體開放閱讀框13抗體包裝1g
L-茶(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Voriconazole冠蛋白3抗體包裝250mg
藍(lán)灰干酪菌Tyomyces│caesius 質(zhì)量規(guī)格:HPLC>98%,標(biāo)準(zhǔn)品血清淀粉樣蛋白A4試劑盒小檗紅堿硫酯;
舟狀單頂孢Monacrosporium│scaphoides 質(zhì)量規(guī)格:>99%,BR,合物血清淀粉樣蛋白A3試劑盒小檗紅堿;Berberrubine
大腸埃希氏菌Escherichia│coli 質(zhì)量規(guī)格:HPLC>98%,標(biāo)準(zhǔn)品血清淀粉樣蛋白A試劑盒腺嘌呤;Adenine
MTS細(xì)胞增殖與毒性檢測(cè)試劑盒赭曲霉 3-基-4-異氧基甲酯EB病Rta蛋白Elisa
紙葡萄穗霉 氟米松EB病Rta蛋白Elisa
釀酒酵母 2,3-二氟-4-氧基苯酸異檸檬酸脫氫2Elisa
德氏乳桿保加利亞亞種 5-氯吡-2-甲酰葡萄糖6磷酸異構(gòu)Elisa
疣青霉 2--3-羧酸吡肝結(jié)合蛋白Elisa
中國平臍蠕孢 2.3-二氟-4-乙氧基苯酸Sal樣蛋白4Elisa
釀酒酵母 2,5-二(2-噻吩基)噻吩并[3,2-b]噻吩CD5分子Elisa
美澳型核果褐腐病 2-甲基-5-硝基吡啶可溶性SCD14受體Elisa
大腸埃希 達(dá)比加群酯羧酸酯1Elisa
pCMV-HA(pCMV-HA-N) 3-氯-4-吡啶甲酸乙酯載脂蛋白L1Elisa
格氏乳球 2-硝基間苯二甲酸AβpE3Elisa
脫皮毛球馬勃* 3-氨基-4-噠羧酸硬脂酰去飽和1Elisa
金灰青霉 2-氯-5-溴-3-三氟甲基吡啶硬脂酰去飽和1Elisa
香菇 3-氟-4-氧代-1-甲酸叔丁酯Δ6去飽和Elisa
黑曲霉 5-氨基-3-氟苯核因子-κB亞基p65親和肽Elisa