以下是細(xì)胞生物學(xué)試劑的詳細(xì)介紹:
中文名稱 | 英文名稱 | 產(chǎn)品規(guī)格 | 發(fā)貨周期 |
PI3Kδ抑制劑(Acalisib) | Acalisib | 1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg|100mg | 1~3天 |
商品介紹:
Acalisib(GS-9820)是有效的選擇性PI3Kδ抑制劑,IC50為12.7nM,。 注:本品僅可用于科研實(shí)驗(yàn),,嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途! CAS號:870281-34-8 別名:GS-9820;CAL-120 分子量:401.4 儲存條件:-20℃,,有效期2年,溶入溶劑后-20℃請盡量在一個月內(nèi)使用。 |
公司產(chǎn)品僅用于科研細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:
1)準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO),,90%;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,,10%,。
2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%,;二氧化碳,,5%。 溫度:37℃,,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%,。
3)凍存液:90%血清,10%DMSO,,現(xiàn)用現(xiàn)配,,液氮儲存。
二.細(xì)胞處理:
1)復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,,移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻,。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻,。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度,。
2)細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對于懸浮細(xì)胞,,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細(xì)胞,,1000RPM,常溫條件下離心5分鐘,,棄去上清液,,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中,。
操作步驟:
1. 樣品染色
1) 將Binding Buffer(10×)稀釋成1×Binding buffer工作液備用(1ml Binding Buffer(10×)需加入9ml無菌去離子水),。
2) 對于懸浮細(xì)胞,,500-1000g離心5min收集細(xì)胞。
對于貼壁細(xì)胞,,要用不含EDTA的胰酶消化細(xì)胞,,胰酶消化時間不宜過長或過短,最好是在輕輕吹打可以使貼壁細(xì)胞吹打下來時,,加入細(xì)胞培養(yǎng)液,,將細(xì)胞輕輕吹打下來,轉(zhuǎn)移到離心管內(nèi),,500-1000g離心5min收集細(xì)胞,。
3) 收集細(xì)胞后,加入預(yù)冷PBS溶液輕搖或用移液器輕柔吹打洗滌,,離心收集細(xì)胞,,共洗滌兩次。
4) 在細(xì)胞沉淀中加入1×Binding buffer工作液,,重懸細(xì)胞,,使細(xì)胞濃度達(dá)到1×106 cell/ml。
5) 吸取100μl細(xì)胞懸液(細(xì)胞總數(shù)為1×105 cell)至一新管中,,加入5μl Annexin V-FITC和5-10 μl PI,,輕輕混勻,室溫避光孵育15min,。
2. 樣品檢測
1) 流式細(xì)胞儀檢測:
染色孵育后,,每管加入400μl 1×Binding Buffer工作液,混勻后使用流式細(xì)胞儀檢測(1小時內(nèi)檢測),。
建議設(shè)置經(jīng)凋亡誘導(dǎo)的正常細(xì)胞,、PI單染和Annexin V-FITC單染3個對照組,正常細(xì)胞組可作為熒光補(bǔ)償調(diào)節(jié)去除光譜重疊和設(shè)定十字門的位置,。結(jié)果可用CellQuest等軟件進(jìn)行分析,,繪制雙色散點(diǎn)圖(two-color dot plot),F(xiàn)ITC為橫坐標(biāo),,PI為縱坐標(biāo),。Annexin V-FITC和PI聯(lián)合使用時,活細(xì)胞僅有很低強(qiáng)度的背景熒光,,早期凋亡細(xì)胞僅有較強(qiáng)的綠色熒光,,晚期凋亡細(xì)胞有綠色和紅色雙重?zé)晒狻?/span>
2) 熒光顯微鏡檢測:
染色孵育后涂片,顯微鏡下觀察,。使用熒光顯微鏡上的藍(lán)光和綠光通道分別觀察FITC和PI,。被Annexin V-FITC結(jié)合的細(xì)胞顯示漿膜上有綠色光環(huán)。喪失細(xì)胞膜完整性的細(xì)胞,,細(xì)胞核顯示紅色,,膜上有綠色光環(huán),。
小鼠組蛋白H2B(H2B)ELISA試劑盒 ,英文名: H2B ELISA Kit
山羊γ干擾素(IFN-γ)ELISA檢測試劑盒GoatIerferonγ,IFN-γELISAKit 96T/48T
犬血纖蛋白原降解產(chǎn)物(FDP)免疫試劑盒 Canine Fibrinogen Degradation Product,FDP ELISA Kit
英文名稱Mouse17-ANPELISAKit小鼠17-羥-孕同(17-ANP)規(guī)格:96T/48T
腸產(chǎn)毒性大腸桿菌(EerotoxigenicE.coli)鑒定16SrDNAPCR擴(kuò)增檢測試劑盒20次
RatFreeThyroxine,FT4ELISA試劑盒大鼠游離甲狀腺素(FT4)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
小鼠白介素23(IL-23)ELISA試劑盒 ,,英文名: IL-23 ELISA Kit
大鼠1,3-βD葡葡糖苷酶(1,3-βDglucosidase)ELISA檢測試劑盒Rat1,3-βDglucosidaseELISAKit 96T/48T
人Toll樣受體2(TLR2)免疫試劑盒 human TLR2 ELISA Kit
英文名稱MouseHCGELISAKit小鼠絨毛促性腺激素(HCG)規(guī)格:96T/48T
AIL蛋白表達(dá)ELISA定量檢測試劑盒25次
rabbitNervegrowthfactor,NGFELISA試劑盒兔子神經(jīng)生長因子(NGF)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
豬血清淀粉樣蛋白A(SAA)ELISA試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
Human myosin light chain kinase (MLCK) ELISA Kit 人肌球蛋白輕鏈激酶(MLCK)ELISA試劑盒
RabbitIerleukin9,IL-9ELISAKit 兔子白介素9(IL-9)ELISA試劑盒 96T/48T 分裝
CLIAKitforai-RV(Humanai-rabiesvirusaibody)ELISAKit人抗狂犬病毒抗體規(guī)格:48T/96T
血液3-羥-3-甲戊二酰輔酶HMG-COA)合成酶活性比色法定量檢測試劑盒20次
Porcineinsulin-likegrowthfactorsbindingprotein3,IGFBP-3ELISAKit豬胰島素樣生長因子結(jié)合蛋白3(IGFBP-3)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
PI3Kδ抑制劑(Acalisib)SHANK 1 英文名稱: 富含脯酸突觸相關(guān)蛋白SHANK1抗體 0.1ml
ENO1 英文名稱: MYC啟動子結(jié)合蛋白1抗體 0.2ml
鈣結(jié)合蛋白S100A1抗體 anti-S-100A1 0.1ml
Anti-TANK/FITC 熒光素標(biāo)記TANK抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Rhesus antibody Rh Phospho-MK1/2(Ser222) 磷酸化原活化蛋白激酶激酶1/2抗體 規(guī)格 0.1ml
Insulin Receptor- Beta(ISR- Beta) 胰島素受體-β(抗原)Multi-class antibodies規(guī)格: 0.5mg