商品介紹:
SYP-5是一種新型HIF-1抑制劑,,抑制腫瘤細(xì)胞侵襲和血管生成。 注:本品僅可用于科研實(shí)驗(yàn),,嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途,! CAS號(hào):1384268-04-5 純度:98.06% 分子量:312.38 儲(chǔ)存條件:-20℃,,有效期2年,,溶入溶劑后-20℃請盡量在一個(gè)月內(nèi)使用。 |
以下是細(xì)胞生物學(xué)試劑的詳細(xì)介紹:
中文名稱 | 英文名稱 | 產(chǎn)品規(guī)格 | 發(fā)貨周期 |
HIF-1抑制劑(SYP-5) | SYP-5 | 1mL(10mM)|1mg|5mg|10mg|50mg|100mg | 1~3天 |
操作步驟:
1. 樣品染色
1) 將Binding Buffer(10×)稀釋成1×Binding buffer工作液備用(1ml Binding Buffer(10×)需加入9ml無菌去離子水),。
2) 對于懸浮細(xì)胞,,500-1000g離心5min收集細(xì)胞。
對于貼壁細(xì)胞,,要用不含EDTA的胰酶消化細(xì)胞,,胰酶消化時(shí)間不宜過長或過短,最好是在輕輕吹打可以使貼壁細(xì)胞吹打下來時(shí),,加入細(xì)胞培養(yǎng)液,將細(xì)胞輕輕吹打下來,,轉(zhuǎn)移到離心管內(nèi),,500-1000g離心5min收集細(xì)胞。
3) 收集細(xì)胞后,,加入預(yù)冷PBS溶液輕搖或用移液器輕柔吹打洗滌,,離心收集細(xì)胞,共洗滌兩次,。
4) 在細(xì)胞沉淀中加入1×Binding buffer工作液,,重懸細(xì)胞,使細(xì)胞濃度達(dá)到1×106 cell/ml,。
5) 吸取100μl細(xì)胞懸液(細(xì)胞總數(shù)為1×105 cell)至一新管中,,加入5μl Annexin V-FITC和5-10 μl PI,,輕輕混勻,室溫避光孵育15min,。
2. 樣品檢測
1) 流式細(xì)胞儀檢測:
染色孵育后,,每管加入400μl 1×Binding Buffer工作液,混勻后使用流式細(xì)胞儀檢測(1小時(shí)內(nèi)檢測),。
建議設(shè)置經(jīng)凋亡誘導(dǎo)的正常細(xì)胞,、PI單染和Annexin V-FITC單染3個(gè)對照組,正常細(xì)胞組可作為熒光補(bǔ)償調(diào)節(jié)去除光譜重疊和設(shè)定十字門的位置,。結(jié)果可用CellQuest等軟件進(jìn)行分析,,繪制雙色散點(diǎn)圖(two-color dot plot),F(xiàn)ITC為橫坐標(biāo),,PI為縱坐標(biāo),。Annexin V-FITC和PI聯(lián)合使用時(shí),活細(xì)胞僅有很低強(qiáng)度的背景熒光,,早期凋亡細(xì)胞僅有較強(qiáng)的綠色熒光,,晚期凋亡細(xì)胞有綠色和紅色雙重?zé)晒狻?/span>
2) 熒光顯微鏡檢測:
染色孵育后涂片,顯微鏡下觀察,。使用熒光顯微鏡上的藍(lán)光和綠光通道分別觀察FITC和PI,。被Annexin V-FITC結(jié)合的細(xì)胞顯示漿膜上有綠色光環(huán)。喪失細(xì)胞膜完整性的細(xì)胞,,細(xì)胞核顯示紅色,,膜上有綠色光環(huán)。
公司產(chǎn)品僅用于科研細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:
1)準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO),,90%,;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%,。
2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,,95%;二氧化碳,,5%,。 溫度:37℃,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%,。
3)凍存液:90%血清,,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配,,液氮儲(chǔ)存,。
二.細(xì)胞處理:
1)復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻,。在1000RPM條件下離心4分鐘,,棄去上清液,,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜,。第二天換液并檢查細(xì)胞密度,。
2)細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng),。
對于懸浮細(xì)胞,,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細(xì)胞,1000RPM,,常溫條件下離心5分鐘,,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,,將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中,。
枯草芽孢桿菌Pichia farinosa
*紅城紅球菌Pichia farinosa
香草蘭根疾Pichia farinosa
黃綠鏈霉菌Pichia membranifaciens
曼被孢霉Pichia membranifaciens
毛頭鬼傘(雞腿菇)Pichia membranifaciens
解脂假絲酵母Hansenula subpelliculosa
抗生鏈霉菌Pichia membranifaciens
細(xì)鏈格孢Yarrowia lipolytica
金孢菌寄生Saccharomyces cerevisiae
大腸埃希氏菌Trichosporon cutaneum
蒼黃鏈霉菌Geotrichum candidum
雅致枝霉Saccharomyces cerevisiae
猴頭菌Saccharomyces cerevisiae
嬰兒配方乳粉 牛磺 Saccharomyces cerevisiae
芒果土賴芽胞桿菌Candida parapsilosis
小鼠單核趨化蛋白2(MCP-2/CCL8)免疫試劑盒堿性亮鏈蛋白BZW1抗體人氧化低密度脂蛋白抗體(OLAb) 青蒿琥酯
小鼠單核趨化蛋白1(MCP-1/CCL2/MCAF)免疫試劑盒骨形態(tài)發(fā)生蛋白受體1B抗體人氧化低密度脂蛋白抗體(OLAb)
小鼠大內(nèi)皮(Big ET)免疫試劑盒Bcl2相互作用蛋白1抗體(轉(zhuǎn)化相關(guān)基因8蛋白)人EJ抗體/抗甘酰tRNA合成抗體(EJ/GlyRS) 青蒿
小鼠大動(dòng)脈平滑肌肌動(dòng)蛋白α2(Acta2/Actsa/Actvs)免疫試劑盒骨形態(tài)發(fā)生蛋白5抗體人EJ抗體/抗甘酰tRNA合成抗體(EJ/GlyRS) 青蒿乙
HIF-1抑制劑(SYP-5)SDHA 英文名稱: 琥珀酸脫氫酶復(fù)合體亞基A抗體 0.1ml
E.coli DH-5 Alpha 英文名稱: DH5α大腸桿菌菌體蛋白抗體 0.1ml
磷酸化鈣/鈣調(diào)素依賴蛋白激酶2α抗體 Anti-phospho-CaMK2a 0.1ml
Anti-Tumstatin/Col4a3/FITC 熒光素標(biāo)記抑素抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Rhesus antibody Rh Phospho-HSP27 (Ser15) 磷酸化熱休克蛋白27抗體 規(guī)格 0.1ml
CBP(CREB-binding protein) CREB結(jié)合蛋白抗原Multi-class antibodies規(guī)格: 0.5mg