公司產(chǎn)品僅用于科研
細(xì)胞生物學(xué)研究有以下幾個(gè)方面:
細(xì)胞生物學(xué)的研究內(nèi)容十分廣泛,主要包括:
①細(xì)胞核,、染色體以及基因表達(dá)的研究,;
②生物膜與細(xì)胞器的研究,;
③細(xì)胞骨架體系的研究,;
④細(xì)胞增殖及其調(diào)控,;
⑤細(xì)胞分化及其調(diào)控;
⑥細(xì)胞的衰老與編程性死亡(凋亡),;
⑦細(xì)胞的起源與進(jìn)化,;
⑧細(xì)胞工程.
產(chǎn)品屬性:
中文名稱:GSK-3β抑制劑(CP21R7)
英文名稱:CP21R7
產(chǎn)品規(guī)格:1mL(10mM)|1mg|5mg|10mg
發(fā)貨周期:1~3天
商品介紹:
CP21R7是一種有效的GSK-3β抑制劑,IC50值為1.8nM,;同時(shí)可抑制PKCα,,IC50值為1900nM。 注:本品僅可用于科研實(shí)驗(yàn),,嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途,! CAS號(hào):125314-13-8 別名:CP21 分子量:317.34 儲(chǔ)存條件:-20℃,有效期2年,,溶入溶劑后-20℃請(qǐng)盡量在一個(gè)月內(nèi)使用,。 |
實(shí)驗(yàn)報(bào)告:
一、分離與培養(yǎng):
1,、無菌條件下,,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,,最后將1mm3左右大?。?/span>
2,、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),,混懸10s,置37℃條件下消化10min,,之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液,自然沉淀并收集上清,,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置,;
3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,,混懸10s,,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,,重復(fù)此步驟2-3次,,直至組織*被消化;
4,、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液,,1200r/min 離心10min,棄去上清,,沉淀細(xì)胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng),;
5,、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,,按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng),;
二、免疫熒光鑒定:
1,、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時(shí),,棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次,,每次10min,,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min;
2,、PBS沖洗細(xì)胞2次,,每次10min,然后在4℃條件下,,用0.1%Triton X-100透膜15min,;
3、PBS沖洗細(xì)胞2次,,每次10min,,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細(xì)胞30min,;
4,、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜,;
5,、PBS沖洗細(xì)胞3次,每次10min,,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗,, 37℃條件下放置1h;
6,、用PBS沖洗3次,,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照,。
操作規(guī)程
1,、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔,通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升2000個(gè)細(xì)胞,,細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升5000~10000個(gè)細(xì)胞(具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目,,需根據(jù)細(xì)胞的大小,細(xì)胞增殖速度的快慢等決定)。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí).
2,、.加入適當(dāng)濃度的0~10μL 受試化合物,。
3、將96孔板在37℃,,含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時(shí)間,。
4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液,。
5,、每孔加50μL 1× MTT 溶液,在37℃孵育4小時(shí),,使MTT 還原為甲臜,。
6、吸出上清液,,每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解,,用平板搖床搖勻。
7,、酶標(biāo)儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度(如無570nm 濾光片,,可以使用560-600nm 的濾光片)。
8,、結(jié)果分析
a,、細(xì)胞的存活率:將各測試孔的OD 值減去本底OD 值(*培養(yǎng)基加MTT,無細(xì)胞)或空白藥物孔OD 值(*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT,,無細(xì)胞),,各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示,,T 為加藥細(xì)胞的OD 值,,C 為對(duì)照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =(加藥細(xì)胞OD/對(duì)照細(xì)胞OD)×100
b,、求出T/C = 50% 時(shí)的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時(shí)的藥物濃度(IC90)
鹽湖洛克氏菌鏈霉偶聯(lián)血藍(lán)蛋白Anti-H2AZ1 Antibody人抗白蛋白抗體(AAA)
紅平菇S腺苷L-同型半胱水解Anti-H2BC4 Antibody人抗白蛋白抗體(AAA)
枝狀枝孢類固硫酯Anti-H2BFS Antibody人抗浦肯野抗體/抗Yo抗體(PCA-1/Yo)
細(xì)交鏈孢霉鏈霉偶聯(lián)牛血清白蛋白Anti-H2BC1 Antibody人抗浦肯野抗體/抗Yo抗體(PCA-1/Yo)
拜城擬諾氏菌P物質(zhì)(抗原)Anti-H2BC1 Antibody人抗Sa抗體(anti-Sa-Ab)
蠟樣芽胞桿菌琥珀脫氫復(fù)合體亞基AAnti-H3-3A Antibody人抗Sa抗體(anti-Sa-Ab)
長雙歧桿菌性激結(jié)合球蛋白多肽Anti-H3C1 Antibody人抗Sa抗體(anti-Sa-Ab)
巨大芽孢桿菌熒光Cy5標(biāo)記鏈霉親和Anti-H3C1 Antibody人抗Sa抗體(anti-Sa-Ab)
斑污擬盤多孔孢鏈霉親和Anti-H4C1 Antibody人抗神經(jīng)元核抗體2型/抗Ri抗體(ANNA-2/Ri)
猿輪狀病性激結(jié)合球蛋白多肽Anti-H4C1 Antibody人抗神經(jīng)元核抗體2型/抗Ri抗體(ANNA-2/Ri)
枯草芽孢桿菌凋亡抑制因子4(抗原)Anti-H4C1 Antibody人異質(zhì)型核糖核蛋白復(fù)合物/抗RA33抗體(hnRNP/RA33)
斯達(dá)亨拿遜酵母鏈霉偶聯(lián)雞卵白蛋白Anti-H4C1 Antibody人異質(zhì)型核糖核蛋白復(fù)合物/抗RA33抗體(hnRNP/RA33)
果生鏈核盤菌甲狀腺球蛋白Anti-H4C1 Antibody人抗Q熱抗體(anti-Q-Ab)
擴(kuò)展青霉四環(huán)偶聯(lián)牛血清白蛋白Anti-H4C1 Antibody人抗Q熱抗體(anti-Q-Ab)
金黃色葡萄球菌(不提供)甲狀腺結(jié)合球蛋白抗原Anti-H4C1 Antibody人抗多發(fā)性肌炎硬皮病抗體(PM-Scl/PM-1)
彎孢四環(huán)偶聯(lián)雞卵白蛋白Anti-H4C1 Antibody人抗多發(fā)性肌炎硬皮病抗體(PM-Scl/PM-1)
睪丸蛋白聚糖1抗體裂褶菌人甲狀腺癌細(xì)胞KTC-1(干細(xì)胞庫保藏)
睪丸蛋白聚糖2抗體黑菇、煙色紅菇人T淋巴細(xì)胞白血病細(xì)胞
SRPX2蛋白抗體鳳尾菇,、漏斗狀側(cè)耳人腎透明細(xì)胞腺癌細(xì)胞
跨膜蛋白SEMA3D抗體味側(cè)耳,、紫孢側(cè)耳人腎母細(xì)胞瘤細(xì)胞
GSK-3β抑制劑(CP21R7)軟毛青霉 8-羥基喹啉
日勾維腸桿 肟
豌豆根瘤 二乙酰一肟
大腸埃希 四苯
嗜熱鏈球 草酸鈦
高盧蜜環(huán) 四草酸
土壤節(jié)桿 硬脂酸
樹生酵母 草酸
糞腸球 油酸
針層孔屬 甲酸
曲霉 檸檬酸
假諾氏 氫
岸喜鹽芽孢桿 草酸氫
葡萄生木層孔 乙酸
腸膜明串珠 鎢酸