以下是細(xì)胞生物學(xué)試劑的詳細(xì)介紹:
公司產(chǎn)品僅用于科研細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:
1)準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO),,90%,;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,,10%,。
2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,,95%,;二氧化碳,,5%。 溫度:37℃,,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%,。
3)凍存液:90%血清,10%DMSO,,現(xiàn)用現(xiàn)配,,液氮儲存。
二.細(xì)胞處理:
1)復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,,移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻,。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻,。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度,。
2)細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對于懸浮細(xì)胞,,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細(xì)胞,,1000RPM,常溫條件下離心5分鐘,,棄去上清液,,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中,。
商品介紹:
CARM1-IN-1是CARM1高效選擇性抑制劑,,IC50值為8.6uM,,對PRMT1和SET7抑制活性很抵。 注:本品僅可用于科研實(shí)驗(yàn),,嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途,! CAS號:1020399-49-8 純度:95.09% 分子量:555.26 儲存條件:-20℃,有效期2年,,溶入溶劑后-20℃請盡量在一個月內(nèi)使用,。 |
操作步驟:
1. 樣品染色
1) 將Binding Buffer(10×)稀釋成1×Binding buffer工作液備用(1ml Binding Buffer(10×)需加入9ml無菌去離子水)。
2) 對于懸浮細(xì)胞,,500-1000g離心5min收集細(xì)胞,。
對于貼壁細(xì)胞,要用不含EDTA的胰酶消化細(xì)胞,,胰酶消化時間不宜過長或過短,,最好是在輕輕吹打可以使貼壁細(xì)胞吹打下來時,加入細(xì)胞培養(yǎng)液,,將細(xì)胞輕輕吹打下來,,轉(zhuǎn)移到離心管內(nèi),500-1000g離心5min收集細(xì)胞,。
3) 收集細(xì)胞后,,加入預(yù)冷PBS溶液輕搖或用移液器輕柔吹打洗滌,離心收集細(xì)胞,,共洗滌兩次,。
4) 在細(xì)胞沉淀中加入1×Binding buffer工作液,重懸細(xì)胞,,使細(xì)胞濃度達(dá)到1×106 cell/ml,。
5) 吸取100μl細(xì)胞懸液(細(xì)胞總數(shù)為1×105 cell)至一新管中,加入5μl Annexin V-FITC和5-10 μl PI,,輕輕混勻,,室溫避光孵育15min。
2. 樣品檢測
1) 流式細(xì)胞儀檢測:
染色孵育后,,每管加入400μl 1×Binding Buffer工作液,,混勻后使用流式細(xì)胞儀檢測(1小時內(nèi)檢測)。
建議設(shè)置經(jīng)凋亡誘導(dǎo)的正常細(xì)胞,、PI單染和Annexin V-FITC單染3個對照組,,正常細(xì)胞組可作為熒光補(bǔ)償調(diào)節(jié)去除光譜重疊和設(shè)定十字門的位置。結(jié)果可用CellQuest等軟件進(jìn)行分析,,繪制雙色散點(diǎn)圖(two-color dot plot),,F(xiàn)ITC為橫坐標(biāo),PI為縱坐標(biāo),。Annexin V-FITC和PI聯(lián)合使用時,,活細(xì)胞僅有很低強(qiáng)度的背景熒光,,早期凋亡細(xì)胞僅有較強(qiáng)的綠色熒光,晚期凋亡細(xì)胞有綠色和紅色雙重?zé)晒狻?/span>
2) 熒光顯微鏡檢測:
染色孵育后涂片,,顯微鏡下觀察,。使用熒光顯微鏡上的藍(lán)光和綠光通道分別觀察FITC和PI。被Annexin V-FITC結(jié)合的細(xì)胞顯示漿膜上有綠色光環(huán),。喪失細(xì)胞膜完整性的細(xì)胞,,細(xì)胞核顯示紅色,膜上有綠色光環(huán),。
類干酪乳桿菌人葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白3Anti-Wnt1 Antibody小鼠17羥皮質(zhì)類固(17-OHCS)
新疆黃桿菌人視黃結(jié)合蛋白Anti-WEE2 Antibody小鼠白介1α(IL-1α)
麥根腐平臍蠕孢人8羥基脫氧鳥苷Anti-WTAP Antibody小鼠白介1α(IL-1α)
綠僵菌人羥賴Anti-WRNIP1 Antibody小鼠白介2(IL-2)
擬青霉屬人GTP活化蛋白Anti-XPA Antibody小鼠白介2(IL-2)
副豬嗜血桿菌人載脂蛋白HAnti-XPA Antibody小鼠白介4(IL-4)
釀酒酵母人糖磷脂酰肌Anti-XPO4 Antibody小鼠白介4(IL-4)
變灰尾孢菌人洲商陸Anti-XRCC2 Antibody小鼠白介6(IL-6)
雅氏艾耳球蟲人脂多糖/內(nèi)Anti-XRCC6 Antibody小鼠白介6(IL-6)
彎曲芽胞桿菌人preptinAnti-XRCC6 Antibody小鼠白介9(IL-9)
球孢白僵菌人過氧化物體增殖物激活受體αAnti-YARS Antibody小鼠白介9(IL-9)
大腸埃希菌人載脂蛋白EAnti-XRN2 Antibody小鼠苗條受體(LR/Ob-R)
冬克青霉人成骨生長肽Anti-YEATS2 Antibody小鼠苗條受體(LR/Ob-R)
Sphingomonas oligoaromativorans人破骨分化因子Anti-YBOX2 Antibody小鼠瘦(LEP)
枯草芽孢桿菌人羥基膠原吡啶交聯(lián)Anti-YOD1 Antibody小鼠瘦(LEP)
黑木耳人脫氧膠原吡啶交聯(lián)Anti-YTHDF1 Antibody小鼠白血病抑制因子(LIF)
癌基因VAV2抗體皺褶革菌中國倉鼠肺細(xì)胞
囊泡相關(guān)膜蛋白相關(guān)的蛋白B黃斑紅菇人類成纖維細(xì)胞系
絲/蘇特定蛋白磷抗體褐黃鱗銹耳大鼠肝細(xì)胞
血管生長因子VG5Q抗體鉛色短孢牛肝菌小鼠X小鼠
CARM1抑制劑(CARM1-IN-1)蘇云金芽孢桿 鄰甲氧基肉桂酸
羊巴貝斯蟲(麻當(dāng)株) 4-(2-吡啶偶氮)間苯二
黃色海假單胞 1-(2-吡啶偶氮)-2-萘
腹?fàn)铉牭?/span> 大果桉B雷帕霉
米曲霉 1-亞硝基-2-萘
黑曲霉 D-蟲熒光鈉
泡盛曲霉變種 克班寧
香氣紅冬孢鎖擲孢酵母 D-蟲熒光游離酸
瑞山海源 苦龍膽酯苷
枯草芽孢桿 石蕊
乳鏈球 甲紅鈉鹽
蠟狀芽孢桿 康普瑞磷酸二鈉
釀酒酵母 康普瑞
都柏林年輕泰坦桿洛桑亞種 甲紅
球孢白僵