以下是細(xì)胞生物學(xué)試劑的詳細(xì)介紹:
公司產(chǎn)品僅用于科研細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:
1)準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO),90%,;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,,10%,。
2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%,;二氧化碳,,5%。 溫度:37℃,,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%,。
3)凍存液:90%血清,10%DMSO,,現(xiàn)用現(xiàn)配,,液氮儲(chǔ)存。
二.細(xì)胞處理:
1)復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,,移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻,。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻,。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過(guò)夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度,。
2)細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對(duì)于懸浮細(xì)胞,,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細(xì)胞,,1000RPM,常溫條件下離心5分鐘,,棄去上清液,,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中,。
商品介紹:
Mogrol是羅漢果甜甙的生物代謝物,,能夠抑制ERK1/2和STAT3的信號(hào)通路,同時(shí)能降低CREB的活性,,活化AMPK,。 注:本品僅可用于科研實(shí)驗(yàn),嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途,! CAS號(hào):88930-15-8 純度:98.06% 分子量:476.73 儲(chǔ)存條件:-20℃,,有效期2年,,溶入溶劑后-20℃請(qǐng)盡量在一個(gè)月內(nèi)使用。 |
操作步驟:
1. 樣品染色
1) 將Binding Buffer(10×)稀釋成1×Binding buffer工作液備用(1ml Binding Buffer(10×)需加入9ml無(wú)菌去離子水),。
2) 對(duì)于懸浮細(xì)胞,,500-1000g離心5min收集細(xì)胞,。
對(duì)于貼壁細(xì)胞,,要用不含EDTA的胰酶消化細(xì)胞,胰酶消化時(shí)間不宜過(guò)長(zhǎng)或過(guò)短,,最好是在輕輕吹打可以使貼壁細(xì)胞吹打下來(lái)時(shí),,加入細(xì)胞培養(yǎng)液,將細(xì)胞輕輕吹打下來(lái),,轉(zhuǎn)移到離心管內(nèi),,500-1000g離心5min收集細(xì)胞。
3) 收集細(xì)胞后,,加入預(yù)冷PBS溶液輕搖或用移液器輕柔吹打洗滌,,離心收集細(xì)胞,共洗滌兩次,。
4) 在細(xì)胞沉淀中加入1×Binding buffer工作液,,重懸細(xì)胞,使細(xì)胞濃度達(dá)到1×106 cell/ml,。
5) 吸取100μl細(xì)胞懸液(細(xì)胞總數(shù)為1×105 cell)至一新管中,,加入5μl Annexin V-FITC和5-10 μl PI,輕輕混勻,,室溫避光孵育15min,。
2. 樣品檢測(cè)
1) 流式細(xì)胞儀檢測(cè):
染色孵育后,每管加入400μl 1×Binding Buffer工作液,,混勻后使用流式細(xì)胞儀檢測(cè)(1小時(shí)內(nèi)檢測(cè)),。
建議設(shè)置經(jīng)凋亡誘導(dǎo)的正常細(xì)胞、PI單染和Annexin V-FITC單染3個(gè)對(duì)照組,,正常細(xì)胞組可作為熒光補(bǔ)償調(diào)節(jié)去除光譜重疊和設(shè)定十字門(mén)的位置,。結(jié)果可用CellQuest等軟件進(jìn)行分析,繪制雙色散點(diǎn)圖(two-color dot plot),,F(xiàn)ITC為橫坐標(biāo),,PI為縱坐標(biāo)。Annexin V-FITC和PI聯(lián)合使用時(shí),,活細(xì)胞僅有很低強(qiáng)度的背景熒光,,早期凋亡細(xì)胞僅有較強(qiáng)的綠色熒光,晚期凋亡細(xì)胞有綠色和紅色雙重?zé)晒狻?/span>
2) 熒光顯微鏡檢測(cè):
染色孵育后涂片,,顯微鏡下觀察,。使用熒光顯微鏡上的藍(lán)光和綠光通道分別觀察FITC和PI,。被Annexin V-FITC結(jié)合的細(xì)胞顯示漿膜上有綠色光環(huán)。喪失細(xì)胞膜完整性的細(xì)胞,,細(xì)胞核顯示紅色,,膜上有綠色光環(huán)。
枯草芽孢桿菌大鼠網(wǎng)膜Anti-OR2F2 Antibody人肽酰脯酰異構(gòu)(親環(huán)蛋白)樣1(PPIL1)
意外鏈霉菌人單核趨化蛋白1Anti-OR2G2 Antibody人肽酰脯酰異構(gòu)(親環(huán)蛋白)樣1(PPIL1)
羅伊氏乳桿菌小鼠轉(zhuǎn)/谷轉(zhuǎn)Anti-OR2D2 Antibody人肽酰脯酰異構(gòu)(親環(huán)蛋白)樣1(PPIL1)
釀酒酵母人L選擇Anti-OR2G3 Antibody人肽酰脯酰異構(gòu)(親環(huán)蛋白)樣1(PPIL1)
毛霉屬小鼠骨形成蛋白Anti-OR2H2 Antibody人促分裂原活化蛋白激激活的蛋白激3(MAPKAPK3)
大腸埃希菌大鼠孤腓肽Anti-OR2I1P Antibody人促分裂原活化蛋白激激活的蛋白激3(MAPKAPK3)
球孢白僵菌小鼠視黃結(jié)合蛋白4Anti-OR2J3 Antibody人血管緊張Ⅰ轉(zhuǎn)化(ACEⅠ)
樟疫霉人白介9Anti-OR2J2 Antibody人血管緊張Ⅰ轉(zhuǎn)化(ACEⅠ)
E.coli EPI400大鼠蛋白磷Anti-OR2K2 Antibody人抑肽(AP)
產(chǎn)腸大腸埃希氏菌大鼠硫氧還蛋白還原Anti-OR2L5 Antibody人抑肽(AP)
白淺灰鏈霉菌人白介8Anti-OR2M3 Antibody人胱天蛋白12(Casp-12)
中國(guó)漢納酵母小鼠6前列腺F1aAnti-OR2M7 Antibody人胱天蛋白12(Casp-12)
樟疫霉人白介6Anti-OR2M2 Antibody人胱天蛋白12(Casp-12)
黃桿菌大鼠硫氧化還原蛋白Anti-OR2T1 Antibody人胱天蛋白12(Casp-12)
枯草芽孢桿菌小鼠戊糖Anti-OR2T10 Antibody人蛋白激A(PKA)
廣布擬盤(pán)多毛孢大鼠膠原IIAnti-OR2T2 Antibody人蛋白激A(PKA)
環(huán)指蛋白32抗體#雙輪絲鏈霉菌小鼠腎臟內(nèi)髓集合管3上皮細(xì)胞
RNA結(jié)合蛋白26抗體#草菇乳乳球菌組成型表達(dá)質(zhì)粒
Nogo66受體相關(guān)蛋白3抗體#天藍(lán)色鏈霉菌McCoy s 5A基礎(chǔ)培養(yǎng)基:
RNA尿苷合結(jié)構(gòu)域蛋白2抗體花生生莖點(diǎn)霉兔紅細(xì)胞6%
ERK1/2和STAT3信號(hào)通路抑制劑(Mogrol)大腸埃希 5,7-Diacetoxy-3,4',8-trimethoxyf
紫色鏈霉 3-Phenyl-1-(pyrrol-1-yl)propan-1
金黃回旋鏈霉 3,5-Diprenyl-4-hydroxybenzaldehy
空腸彎曲桿 3,4-Dimethoxycinnamyl alcohol
乙型副傷寒沙門(mén)氏 3,4-Dihydroxycinnamamide
假單胞屬 21-表千層塔烯二
樹(shù)舌靈芝 2,6-二甲氧基-1-乙酰甲基
古巴栓孔 2,4,6,6-四甲基-3(6H)-吡啶酮
葡萄座腔 2,2,5,5-四甲基環(huán)己烷-1,
木克酵母屬 1-甲氧基羰基-beta-咔啉
水桿 (+)-N-Methylallosedridine
克勞氏芽孢桿 (-)-白花前胡乙
亞螺毛殼 (-)-白花前胡甲
盤(pán)長(zhǎng)孢狀盤(pán)孢 檉柳黃
羊無(wú)漿體(寧縣盤(pán)克株) 華良姜