以下是細胞生物學(xué)試劑的詳細介紹:
公司產(chǎn)品僅用于科研細胞培養(yǎng)操作規(guī)程:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備:
1)準備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO),,90%,;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%,。
2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,,95%;二氧化碳,,5%,。 溫度:37℃,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%,。
3)凍存液:90%血清,,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配,,液氮儲存,。
二.細胞處理:
1)復(fù)蘇細胞:將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,,移入事先準備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,,棄去上清液,,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜,。第二天換液并檢查細胞密度,。
2)細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養(yǎng),。
對于懸浮細胞,,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細胞,1000RPM,,常溫條件下離心5分鐘,,棄去上清液,補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,,將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中,。
商品介紹:
BP-1-102是有的轉(zhuǎn)錄因子Stat3的小分子抑制劑。 注:本品僅可用于科研實驗,,嚴禁用于臨床醫(yī)療及其他用途,! CAS號:1334493-07-0 純度:99.23% 分子量:626.59 儲存條件:-20℃,有效期2年,,溶入溶劑后-20℃請盡量在一個月內(nèi)使用,。 |
操作步驟:
1. 樣品染色
1) 將Binding Buffer(10×)稀釋成1×Binding buffer工作液備用(1ml Binding Buffer(10×)需加入9ml無菌去離子水),。
2) 對于懸浮細胞,,500-1000g離心5min收集細胞。
對于貼壁細胞,,要用不含EDTA的胰酶消化細胞,,胰酶消化時間不宜過長或過短,最好是在輕輕吹打可以使貼壁細胞吹打下來時,,加入細胞培養(yǎng)液,,將細胞輕輕吹打下來,轉(zhuǎn)移到離心管內(nèi),,500-1000g離心5min收集細胞,。
3) 收集細胞后,加入預(yù)冷PBS溶液輕搖或用移液器輕柔吹打洗滌,,離心收集細胞,,共洗滌兩次。
4) 在細胞沉淀中加入1×Binding buffer工作液,,重懸細胞,,使細胞濃度達到1×106 cell/ml,。
5) 吸取100μl細胞懸液(細胞總數(shù)為1×105 cell)至一新管中,加入5μl Annexin V-FITC和5-10 μl PI,,輕輕混勻,,室溫避光孵育15min。
2. 樣品檢測
1) 流式細胞儀檢測:
染色孵育后,,每管加入400μl 1×Binding Buffer工作液,,混勻后使用流式細胞儀檢測(1小時內(nèi)檢測)。
建議設(shè)置經(jīng)凋亡誘導(dǎo)的正常細胞,、PI單染和Annexin V-FITC單染3個對照組,,正常細胞組可作為熒光補償調(diào)節(jié)去除光譜重疊和設(shè)定十字門的位置。結(jié)果可用CellQuest等軟件進行分析,,繪制雙色散點圖(two-color dot plot),,F(xiàn)ITC為橫坐標,PI為縱坐標,。Annexin V-FITC和PI聯(lián)合使用時,,活細胞僅有很低強度的背景熒光,早期凋亡細胞僅有較強的綠色熒光,,晚期凋亡細胞有綠色和紅色雙重?zé)晒狻?/span>
2) 熒光顯微鏡檢測:
染色孵育后涂片,,顯微鏡下觀察。使用熒光顯微鏡上的藍光和綠光通道分別觀察FITC和PI,。被Annexin V-FITC結(jié)合的細胞顯示漿膜上有綠色光環(huán),。喪失細胞膜完整性的細胞,細胞核顯示紅色,,膜上有綠色光環(huán),。
微桿菌屬白介-17抗原(人)Anti-GRID2 Antibody人抗突變型瓜波形蛋白抗體(MCV)
蠟狀芽孢桿菌胰島Anti-GRIN1 Antibody人抗突變型瓜波形蛋白抗體(MCV)
枯草芽孢桿菌重組人胰島因子Anti-GREM2 Antibody人抗髓磷脂抗體IgA(AMA IgA)
筑波擬酵母胰島樣生長因子-II(抗原)Anti-GRIN2D Antibody人抗髓磷脂抗體IgA(AMA IgA)
膠孢胰島樣生長因子-I(抗原)Anti-GRIN2D Antibody人抗突變型瓜波形蛋白抗體(MCV)
弗雷德里克斯堡假單胞菌-3-乙偶聯(lián)牛血清白蛋白Anti-GRK3 Antibody人抗突變型瓜波形蛋白抗體(MCV)
微小鏈霉菌白介-17抗原Anti-GRIN2B Antibody人抗髓磷脂抗體IgA(AMA IgA)
彩色豆馬勃豬胰島Anti-GRK1 Antibody人抗髓磷脂抗體IgA(AMA IgA)
擴展青霉間粘附分子-2抗原Anti-GRM4 Antibody人抗腮腺管抗體(anti-parotid duct Ab)
巴斯德畢赤酵母白介1α/IL-1αAnti-GRK7 Antibody人抗腮腺管抗體(anti-parotid duct Ab)
蘇云金芽孢桿菌庫爾斯塔克亞種血藍蛋白Anti-GRK6 Antibody人抗軟骨抗體(anti-cartilage-Ab)
斑污擬盤多孔孢Ki-67Anti-GRM3 Antibody人抗軟骨抗體(anti-cartilage-Ab)
灰平鏈霉菌脂質(zhì)運載蛋白Anti-GRM6 Antibody人抗人絨毛膜促性腺激抗體(AhCGAb)
釀酒酵母瘦Anti-GRM6 Antibody人抗人絨毛膜促性腺激抗體(AhCGAb)
淡紫擬青霉甲硝唑偶聯(lián)牛血清白蛋白Anti-GSC Antibody人抗染色體抗體(anti-chromosome Ab)
費比恩畢赤酵母與血藍蛋白偶聯(lián)物Anti-GSC2 Antibody人抗染色體抗體(anti-chromosome Ab)
DNA結(jié)合蛋白2抗體日本根霉人巨核細胞白血病細胞
轉(zhuǎn)錄因子蛋白SIM2抗體側(cè)耳人胰腺癌細胞(干細胞庫保藏)
鉀離子轉(zhuǎn)運蛋白3抗體綠色木霉貓星形腦膠質(zhì)細胞
鈣結(jié)合線粒體載體蛋白抗體粉紅木霉彌漫性組織淋巴瘤細胞
轉(zhuǎn)錄因子Stat3小分子抑制劑(BP-1-102)硒砷芽孢桿 阿魏酸
庫德里阿茲威畢赤酵母 三聚酸
落葉松層孔 檸酸
枯草芽孢桿 肉桂酸
白靈側(cè)耳 α-溴異丁酸
赤曲霉 鎢酸
人參地土地桿 硅鎢酸
靈芝(紅芝, 赤芝) 鉬酸
異常漢遜酵母 丹寧酸
釀酒酵母 順-15-二十四碳單烯酸
普霍瓦富鹽 D-
佩特曲霉 DL-
猴頭 L-
米曲霉 1,5-二羥基萘
運動節(jié)桿 2,2-二羥基二硫代-6,6-聯(lián)萘