以下是細胞生物學(xué)試劑的詳細介紹:
中文名稱 | 英文名稱 | 產(chǎn)品規(guī)格 | 發(fā)貨周期 |
Btk抑制劑(CNX-774) | CNX-774 | 1mL(10mM)|2mg|5mg|10mg|50mg | 1~3天 |
公司產(chǎn)品僅用于科研細胞培養(yǎng)操作規(guī)程:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:
1)準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO),,90%;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,,10%,。
2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%,;二氧化碳,,5%。 溫度:37℃,,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%,。
3)凍存液:90%血清,10%DMSO,,現(xiàn)用現(xiàn)配,,液氮儲存。
二.細胞處理:
1)復(fù)蘇細胞:將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,,移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻,。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻,。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細胞密度,。
2)細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,,即可進行傳代培養(yǎng)。
對于懸浮細胞,,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細胞,,1000RPM,常溫條件下離心5分鐘,,棄去上清液,,補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中,。
商品介紹:
CNX-774是高效Btk抑制劑,,IC50<1nM,能與活性位點上的Cys-481形成配體導(dǎo)向的共價鍵,。 注:本品僅可用于科研實驗,,嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途! CAS號:1202759-32-7 純度:99.74% 分子量:499.5 儲存條件:-20℃,,有效期2年,,溶入溶劑后-20℃請盡量在一個月內(nèi)使用。 |
操作步驟:
1. 樣品染色
1) 將Binding Buffer(10×)稀釋成1×Binding buffer工作液備用(1ml Binding Buffer(10×)需加入9ml無菌去離子水),。
2) 對于懸浮細胞,,500-1000g離心5min收集細胞,。
對于貼壁細胞,要用不含EDTA的胰酶消化細胞,,胰酶消化時間不宜過長或過短,,最好是在輕輕吹打可以使貼壁細胞吹打下來時,加入細胞培養(yǎng)液,,將細胞輕輕吹打下來,,轉(zhuǎn)移到離心管內(nèi),500-1000g離心5min收集細胞,。
3) 收集細胞后,,加入預(yù)冷PBS溶液輕搖或用移液器輕柔吹打洗滌,離心收集細胞,,共洗滌兩次,。
4) 在細胞沉淀中加入1×Binding buffer工作液,重懸細胞,,使細胞濃度達到1×106 cell/ml,。
5) 吸取100μl細胞懸液(細胞總數(shù)為1×105 cell)至一新管中,加入5μl Annexin V-FITC和5-10 μl PI,,輕輕混勻,,室溫避光孵育15min。
2. 樣品檢測
1) 流式細胞儀檢測:
染色孵育后,,每管加入400μl 1×Binding Buffer工作液,,混勻后使用流式細胞儀檢測(1小時內(nèi)檢測)。
建議設(shè)置經(jīng)凋亡誘導(dǎo)的正常細胞,、PI單染和Annexin V-FITC單染3個對照組,正常細胞組可作為熒光補償調(diào)節(jié)去除光譜重疊和設(shè)定十字門的位置,。結(jié)果可用CellQuest等軟件進行分析,,繪制雙色散點圖(two-color dot plot),F(xiàn)ITC為橫坐標(biāo),,PI為縱坐標(biāo),。Annexin V-FITC和PI聯(lián)合使用時,活細胞僅有很低強度的背景熒光,,早期凋亡細胞僅有較強的綠色熒光,,晚期凋亡細胞有綠色和紅色雙重?zé)晒狻?/span>
2) 熒光顯微鏡檢測:
染色孵育后涂片,顯微鏡下觀察,。使用熒光顯微鏡上的藍光和綠光通道分別觀察FITC和PI,。被Annexin V-FITC結(jié)合的細胞顯示漿膜上有綠色光環(huán)。喪失細胞膜完整性的細胞,,細胞核顯示紅色,,膜上有綠色光環(huán),。
小鼠轉(zhuǎn)化生長因子β(TGFβ1)ELISA試劑盒 ,英文名: TGFβ1 ELISA Kit
小鼠糖原磷酸化酶同工酶MM(GP-MM)ELISA檢測試劑盒MouseGlycogenphosphorylaseMM,GP-MMELISAKit 96T/48T
人抗SS-B/La抗體免疫試劑盒 Human SS-B/La Aibody,ELISA Kit
Rabbitα2-Aiplasmin,α2-APELISAKit兔子α2抗纖溶酶(α2-AP)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
載玻片細胞IL蛋白表達NBT顯色光學(xué)顯微鏡檢測試劑盒10/20次
Humanβ-Thromboglobulin,β-TGELISA試劑盒人β血小板球蛋白/β血栓環(huán)蛋白(β-TG)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
小鼠白介素1β(IL-1B)ELISA試劑盒 ,,英文名: IL-1B ELISA Kit
魚類超敏C反應(yīng)蛋白(hs-CRP)ELISA檢測試劑盒FishhighsensitivityC-ReactiveProtein,hs-CRPELISAKit 96T/48T
人1,5-脫水葡萄糖醇/1,5-脫水山梨(1,5-AG)免疫試劑盒 Human 1,5-anhydroglucitol(1,5-AG)ELISA Kit
英文名稱MouseCCL26ELISAKit小鼠CCL26規(guī)格:96T/48T
冰凍切片組織衰老特異性β-半乳糖苷酶原位染色試劑盒50次
RatEotaxin1ELISA試劑盒大鼠嗜酸粒細胞趨化蛋白Eotaxin1(Eotaxin1/CCL11)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
豬神經(jīng)特異性烯醇化酶(NSE)ELISA試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
Human kallikrein 6 (KLK 6) ELISA Kit 人激肽釋放酶6(KLK 6)ELISA試劑盒
GuineaPigIerleukin1receptoraagonist,IL-1raELISAkit 豚鼠白介素1受體拮抗劑(IL1Ra)ELISA試劑盒 96T/48T 分裝
CLIAKitforANG(HumanAngiogenin)ELISAKit人血管生長素規(guī)格:48T/96T
血液脯氨酸(proline)含量比色法定量檢測試劑盒20次
PorcineEndothelialniicoxidesyhase3,eNOS-3ELISAKit豬內(nèi)皮型一氧化氮合成酶3(eNOS-3)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
Btk抑制劑(CNX-774)STAT1 p84+p91 英文名稱: 信號轉(zhuǎn)導(dǎo)與轉(zhuǎn)錄激活因子1抗體 0.2ml
FOXM1 英文名稱: 叉頭蛋白M1抗體 0.2ml
髓樣分化蛋白抗體 Anti-MyD88 0.1ml
Anti-Sema6A/FITC 熒光素標(biāo)記抗Sema6A抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Rhesus antibody Rh phospho-PARK2(Ser378) 磷酸化帕金蛋白抗體 規(guī)格 0.1ml
AGER(Advanced glycosylation end product-specific receptor) 晚期糖基化終末產(chǎn)物特異性受體(抗原)Multi-class antibodies規(guī)格: 0.5mg