公司產(chǎn)品僅用于科研
細(xì)胞生物學(xué)研究有以下幾個方面:
細(xì)胞生物學(xué)的研究內(nèi)容十分廣泛,主要包括:
①細(xì)胞核、染色體以及基因表達(dá)的研究,;
②生物膜與細(xì)胞器的研究,;
③細(xì)胞骨架體系的研究;
④細(xì)胞增殖及其調(diào)控,;
⑤細(xì)胞分化及其調(diào)控,;
⑥細(xì)胞的衰老與編程性死亡(凋亡);
⑦細(xì)胞的起源與進(jìn)化,;
⑧細(xì)胞工程.
產(chǎn)品屬性:
中文名稱:Raf激酶抑制劑(L-779450)
英文名稱:L-779450
產(chǎn)品規(guī)格:1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg|100mg
發(fā)貨周期:1~3天
商品介紹:
L-779450是Raf激酶高效選擇性抑制劑,,IC50值為10nM,對p38_alpha_,,GSK3_beta_和Lck活性弱,。 注:本品僅可用于科研實(shí)驗(yàn),嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途! CAS號:303727-31-3 分子量:347.8 儲存條件:-20℃,,有效期2年,,溶入溶劑后-20℃請盡量在一個月內(nèi)使用。 |
實(shí)驗(yàn)報告:
一,、分離與培養(yǎng):
1,、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,,然后用PBS將此組織塊清洗2次,,最后將1mm3左右大小,;
2,、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,,置37℃條件下消化10min,,之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液,自然沉淀并收集上清,,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置,;
3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,,混懸10s,,置37℃消化10 min后,,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,,重復(fù)此步驟2-3次,直至組織*被消化,;
4,、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液,1200r/min 離心10min,,棄去上清,,沉淀細(xì)胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,,放置于37℃ ,,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng);
5,、差速貼壁1h后,,吸出培養(yǎng)基,按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng),;
二,、免疫熒光鑒定:
1、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時,棄去培養(yǎng)基,,用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次,,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min,;
2,、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,,然后在4℃條件下,,用0.1%Triton X-100透膜15min;
3,、PBS沖洗細(xì)胞2次,,每次10min,然后在室溫條件下,,用4% BSA封閉細(xì)胞30min,;
4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,,然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜,;
5、PBS沖洗細(xì)胞3次,,每次10min,,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h,;
6,、用PBS沖洗3次,每次10min,,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照,。
操作規(guī)程
1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔,,通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升2000個細(xì)胞,,細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升5000~10000個細(xì)胞(具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目,需根據(jù)細(xì)胞的大小,,細(xì)胞增殖速度的快慢等決定),。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時.
2、.加入適當(dāng)濃度的0~10μL 受試化合物,。
3,、將96孔板在37℃,含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時間,。
4,、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。
5,、每孔加50μL 1× MTT 溶液,,在37℃孵育4小時,使MTT 還原為甲臜,。
6,、吸出上清液,每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解,,用平板搖床搖勻,。
7、酶標(biāo)儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度(如無570nm 濾光片,,可以使用560-600nm 的濾光片),。
8、結(jié)果分析
a,、細(xì)胞的存活率:將各測試孔的OD 值減去本底OD 值(*培養(yǎng)基加MTT,,無細(xì)胞)或空白藥物孔OD 值(*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT,無細(xì)胞),,各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD,。細(xì)胞的存活率以T/C%表示,T 為加藥細(xì)胞的OD 值,,C 為對照細(xì)胞的OD 值,。細(xì)胞存活率% =(加藥細(xì)胞OD/對照細(xì)胞OD)×100
b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)
小鼠轉(zhuǎn)化生長因子β3(TGFβ3)ELISA試劑盒 ,,英文名: TGFβ3 ELISA Kit
犬雌激素(E)ELISA檢測試劑盒Canineesogen,EELISAKit 96T/48T
犬維(VE)免疫試劑盒 Canine Vitamin E,VE ELISA Kit
英文名稱HumanansformingGrowthfactorαELISAKIT人轉(zhuǎn)化生長因子α(TGFα)規(guī)格:96T/48T
超氧化物歧化酶(SOD)活性檢測試劑盒50次
Ratgonadoopin-releasinghormone,GHELISA試劑盒大鼠促激素釋放激素(GH)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
小鼠白介素1δ(FIL1δ)ELISA試劑盒 ,,英文名: FIL1δ ELISA Kit
人甲狀腺刺激免疫球蛋白(TSI)ELISA檢測試劑盒humahyroidstimulatingimmunoglobulin,TSIELISAKit 96T/48T
大鼠巨噬細(xì)胞替代激活相關(guān)化學(xué)因子1(AmAC-1)免疫試劑盒 Rat Alternative macrophage activation-associated CC chemokine 1,AMAC-1 ELISA Kit
英文名稱RatGamma-aminobyricacidELISAKit大鼠γ氨基丁酸(GABA)規(guī)格:96T/48T
聚丙烯酰胺凝膠粉碎法膠回收試劑盒20次
ELISAKitHSPgp96人熱休克蛋白糖蛋白96規(guī)格:48T/96T
豬食欲素/阿立新B(OX-B)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
Human somelysin-3 (ST2) ELISA Kit 人基質(zhì)裂解素(ST2)ELISA試劑盒
GuineapigovalbuminspecificIgE,OVAsIgEELISAKit 豚鼠卵清蛋白特異性IgE(OVAsIgE)Elisa試劑盒 96T/48T 分裝
CLIAKitforANG-2(HumanAngiopoietin2)ELISAKit人血管生成素2規(guī)格:48T/96T
血液對氧磷酶1(PON1)芳香酯酶活性比色法定量檢測試劑盒
PorcineE-SelectinELISAKit豬E選擇素(E-Selectin/CD62E)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
Raf激酶抑制劑(L-779450)SUGT1 英文名稱: SUGT1蛋白抗體 0.2ml
Escherichka coli K88-K99 英文名稱: 豬源產(chǎn)腸毒素性大腸桿菌K88-K99抗體 0.2ml
胚胎干細(xì)胞關(guān)鍵蛋白抗體 Anti-Nanog 0.1ml
Anti-SGLT1 /FITC 熒光素標(biāo)記鈉-葡萄糖共轉(zhuǎn)運(yùn)載體1抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Rhesus antibody Rh Phospho-PAK4(Ser474)/PAK5(Ser602)/PAK6(Ser560) 磷酸化p21激活激酶4/5/6抗體 規(guī)格 0.1ml
Akt/PKB 蛋白激酶B(抗原)Multi-class antibodies規(guī)格: 0.5mg