液泡V-ATP酶抑制劑(Bafilomycin A1)公司*的產(chǎn)品：Smad4(Mothers against decapentaplegic homolog 4) Smad4抗原4,4,4-三氟巴豆酯 98%
Smad7(Mothers against decapentaplegic homolog 7) Smad 7(多肽)3-氨-4,4,4-三氟酯 97%
phosphor-SMA

產(chǎn)品屬性：

中文名稱：液泡V-ATP酶抑制劑(Bafilomycin A1)

英文名稱：Bafilomycin A1

產(chǎn)品規(guī)格：1mL(10mM)|100ug|1mg|5mg

發(fā)貨周期：1～3天
公司產(chǎn)品僅用于科研

商品介紹：

細(xì)胞生物學(xué)研究有以下幾個(gè)方面：

細(xì)胞生物學(xué)的研究?jī)?nèi)容十分廣泛,主要包括：

①細(xì)胞核,、染色體以及基因表達(dá)的研究,；

②生物膜與細(xì)胞器的研究；

③細(xì)胞骨架體系的研究,；

④細(xì)胞增殖及其調(diào)控,；

⑤細(xì)胞分化及其調(diào)控；

⑥細(xì)胞的衰老與編程性死亡(凋亡),；

⑦細(xì)胞的起源與進(jìn)化,；

⑧細(xì)胞工程.

實(shí)驗(yàn)報(bào)告：

一、分離與培養(yǎng)：

1,、無(wú)菌條件下,，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次,，最后將1mm3左右大?。?/span>

2,、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶）,，混懸10s,，置37℃條件下消化10min,，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液,，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置,；

3,、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s,，置37℃消化10 min后,，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次,，直至組織*被消化,；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液,，1200r/min 離心10min,，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,，接種于25cm2培養(yǎng)瓶,，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng),；

5,、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基,，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng),；

二、免疫熒光鑒定：

1,、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí),，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次,，每次10min,，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；

2,、PBS沖洗細(xì)胞2次,，每次10min，然后在4℃條件下,，用0.1％Triton X-100透膜15min,；

3、PBS沖洗細(xì)胞2次,，每次10min,，然后在室溫條件下,，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；

4,、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗,，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜；

5,、PBS沖洗細(xì)胞3次,，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗,， 37℃條件下放置1h,；

6、用PBS沖洗3次,，每次10min,，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

 

意大利青霉Penicillium│italicum 質(zhì)量規(guī)格：0.99洋川芎內(nèi)酯I

聚團(tuán)拉布倫茨氏菌Labrenzia│aggregata 質(zhì)量規(guī)格：光譜純SP洋川芎內(nèi)酯H

杉葉散斑殼Lophodermium│uncinatum Darker 質(zhì)量規(guī)格：0.9洋川芎內(nèi)酯A
液泡V-ATP酶抑制劑(Bafilomycin A1)黑附球 Ru(bpy)2(mcbpy-O-Su-ester)(PF6)2γ-氨基丁酸轉(zhuǎn)氨Elisa

雙孢蘑菇 N-芐基-2-萘γ-氨基丁酸轉(zhuǎn)氨Elisa

瓊氏不動(dòng)桿 2',6'-二氟苯乙酮乙酰轉(zhuǎn)移Elisa

多主葡萄殼 2,7-二溴咔唑肉堿棕櫚酰轉(zhuǎn)移Elisa

根瘤 2,4-二氟苯磺酰檸檬酸合成Elisa

豌豆根瘤 Fmoc-3-硝基-L-酪氨酸卵黃蛋白Elisa

淀粉鏈霉 N-[芴甲氧羰基]-D-色氨酸五氟甲基酯漆Elisa

褐色馬勃 2,3,6-三氟苯甲單酚氧化Elisa

黃棕鏈霉 4-羧基-3-苯酸雙酚氧化Elisa

Lasiodiplodia rubropurpurea Abacavir血凝;凝集Elisa

束叢鏈霉 2,6-二氟吡啶-3-酸糖基轉(zhuǎn)移Elisa

深粘紅酵母 N-叔丁基-十氫異喹啉-3(S)-甲酰尿苷二磷酸葡萄糖酸轉(zhuǎn)移Elisa

達(dá)格斯坦鏈霉 1-溴-2-氟-4-苯原癌基因c-Met蛋白Elisa

玉蕈（真姬菇） 鹽酸度洛可溶性糖Elisa

煙管 4-溴-3-過氧化Elisa 

操作規(guī)程

1,、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔,，通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升2000個(gè)細(xì)胞，細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升5000～10000個(gè)細(xì)胞（具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目,，需根據(jù)細(xì)胞的大小,，細(xì)胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí).

2,、.加入適當(dāng)濃度的0～10μL 受試化合物,。

3、將96孔板在37℃,，含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時(shí)間,。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液,。

5,、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時(shí),，使MTT 還原為甲臜,。

6、吸出上清液,，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解,，用平板搖床搖勻。

7,、酶標(biāo)儀在570nm 波長(zhǎng)處檢測(cè)每孔的光密度（如無(wú)570nm 濾光片,，可以使用560-600nm 的濾光片）。

8,、結(jié)果分析

a,、細(xì)胞的存活率：將各測(cè)試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT,，無(wú)細(xì)胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無(wú)細(xì)胞）,，各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD,。細(xì)胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細(xì)胞的OD 值,，C 為對(duì)照細(xì)胞的OD 值,。細(xì)胞存活率% =（加藥細(xì)胞OD/對(duì)照細(xì)胞OD）×100

b,、求出T/C = 50% 時(shí)的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時(shí)的藥物濃度(IC90)