以下是細胞生物學(xué)試劑的詳細介紹:
公司產(chǎn)品僅用于科研細胞培養(yǎng)操作規(guī)程:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:
1)準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO),90%,;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,,10%,。
2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%,;二氧化碳,,5%。 溫度:37℃,,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%,。
3)凍存液:90%血清,10%DMSO,,現(xiàn)用現(xiàn)配,,液氮儲存。
二.細胞處理:
1)復(fù)蘇細胞:將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,,移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻,。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻,。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細胞密度,。
2)細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,,即可進行傳代培養(yǎng)。
對于懸浮細胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細胞,,1000RPM,,常溫條件下離心5分鐘,棄去上清液,,補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,,將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
商品介紹:
GNF-5是GNF-2的類似物,,具有更好的藥物動力學(xué)活性,,是非ATP競爭性的Bcr-Abl抑制劑,IC50為0.22uM,。 注:本品僅可用于科研實驗,,嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途! CAS號:778277-15-9 純度:98.0% 分子量:418.37 儲存條件:-20℃,,有效期2年,,溶入溶劑后-20℃請盡量在一個月內(nèi)使用。 |
操作步驟:
1. 樣品染色
1) 將Binding Buffer(10×)稀釋成1×Binding buffer工作液備用(1ml Binding Buffer(10×)需加入9ml無菌去離子水),。
2) 對于懸浮細胞,,500-1000g離心5min收集細胞。
對于貼壁細胞,,要用不含EDTA的胰酶消化細胞,,胰酶消化時間不宜過長或過短,最好是在輕輕吹打可以使貼壁細胞吹打下來時,,加入細胞培養(yǎng)液,,將細胞輕輕吹打下來,轉(zhuǎn)移到離心管內(nèi),,500-1000g離心5min收集細胞,。
3) 收集細胞后,加入預(yù)冷PBS溶液輕搖或用移液器輕柔吹打洗滌,,離心收集細胞,,共洗滌兩次。
4) 在細胞沉淀中加入1×Binding buffer工作液,,重懸細胞,,使細胞濃度達到1×106 cell/ml。
5) 吸取100μl細胞懸液(細胞總數(shù)為1×105 cell)至一新管中,,加入5μl Annexin V-FITC和5-10 μl PI,,輕輕混勻,室溫避光孵育15min,。
2. 樣品檢測
1) 流式細胞儀檢測:
染色孵育后,,每管加入400μl 1×Binding Buffer工作液,,混勻后使用流式細胞儀檢測(1小時內(nèi)檢測)。
建議設(shè)置經(jīng)凋亡誘導(dǎo)的正常細胞,、PI單染和Annexin V-FITC單染3個對照組,,正常細胞組可作為熒光補償調(diào)節(jié)去除光譜重疊和設(shè)定十字門的位置。結(jié)果可用CellQuest等軟件進行分析,,繪制雙色散點圖(two-color dot plot),,F(xiàn)ITC為橫坐標(biāo),PI為縱坐標(biāo),。Annexin V-FITC和PI聯(lián)合使用時,,活細胞僅有很低強度的背景熒光,早期凋亡細胞僅有較強的綠色熒光,,晚期凋亡細胞有綠色和紅色雙重?zé)晒狻?/span>
2) 熒光顯微鏡檢測:
染色孵育后涂片,,顯微鏡下觀察。使用熒光顯微鏡上的藍光和綠光通道分別觀察FITC和PI,。被Annexin V-FITC結(jié)合的細胞顯示漿膜上有綠色光環(huán),。喪失細胞膜完整性的細胞,細胞核顯示紅色,,膜上有綠色光環(huán),。
小鼠轉(zhuǎn)化生長因子β受體Ⅱ(TGFβR2)ELISA試劑盒 ,英文名: TGFβR2 ELISA Kit
犬胰島素受體β(ISR-β)ELISA檢測試劑盒CanineInsulieceptorβ,ISR-βELISAKIT 96T/48T
犬細胞間粘附分子1(ICAM-1/CD54)免疫試劑盒 Dog iercellular adhesion molecule 1,ICAM-1/CD54 ELISA Kit
英文名稱HumanansferrieceptorELISAKit人轉(zhuǎn)鐵蛋白受體(TFR)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
超氧化物歧化酶(SOD)紅細胞裂解樣品制備試劑盒50次
Ratglycogensyhasekinase,GSKELISA試劑盒大鼠糖原合成酶激酶(GSK)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
小鼠白介素1可溶性受體Ⅰ(IL-1sRⅠ)ELISA試劑盒 ,,英文名: IL-1sRⅠ ELISA Kit
大鼠轉(zhuǎn)化生長因子β1(TGF-β1)ELISA檢測試劑盒RatansformingGrowthfactorβ1,TGF-β1ELISAkit 96T/48T
人Syndecan-1/CD138(SDC1)免疫試劑盒 Human SDC1 ELISA Kit
英文名稱MouseDHEA-SELISAKit小鼠去氫表雄同(DHEA-S)規(guī)格:96T/48T
TSH-BETA蛋白表達ELISA定量檢測試劑盒25次
rabbitN-terminalprocollagenⅢpropeptide,PⅢNPELISA試劑盒兔子Ⅲ型前膠原肽(PⅢNP)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
豬水通道蛋白4(AQP4)ELISA試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
Human tissue inhibitors of maix metalloproteinases 1 (TIMP-1) ELISA Kit 人基質(zhì)金屬蛋白酶組織抑制因子1(TIMP-1)ELISA試劑盒
GuineaPigEndothelialniicoxidesyhase,eNOSELISAKit 豚鼠內(nèi)皮型一氧化氮合成酶(eNOS)ELISA試劑盒 96T/48T 分裝
CLIAKitforANG-4(MouseAngiopoietin4)ELISAKit小鼠血管生成素4規(guī)格:48T/96T
血液丁酰膽堿酯酶活性比色法定量檢測試劑盒20次
PorcineFactor-relatedApoptosis,FASELISAKit豬凋亡相關(guān)因子(FAS/CD95)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
Bcr-Abl抑制劑(GNF-5)SISP1 英文名稱: 應(yīng)激誘導(dǎo)分泌蛋白1抗體 0.1ml
Phospho-eNOS (Thr113) 英文名稱: 磷酸化一氧化氮合成酶3(內(nèi)皮型)抗體 0.1ml
N-鈣粘附分子抗體 Anti-N-cadherin 0.1ml
Anti-Phospho-SGK1 (Ser422) /FITC 熒光素標(biāo)記磷酸化糖皮質(zhì)激素調(diào)節(jié)激酶1抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Rhesus antibody Rh Phospho-PAK2 (Ser20) 磷酸化p21激活激酶2抗體 規(guī)格 0.1ml
Akt/PKB 蛋白激酶B(抗原)Multi-class antibodies規(guī)格: 0.5mg