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ELISA試劑盒為什么會(huì)變質(zhì)呢,？是什么影響了ELISA試劑盒質(zhì)保,？一旦變質(zhì)會(huì)有什么影響呢？
1.方法學(xué)的影響
ELISA測(cè)定模式包括以下幾種：雙抗體夾心法、間接法,、雙抗原夾心法,、IgM抗體捕捉法、競(jìng)爭(zhēng)抑制法,，其中競(jìng)爭(zhēng)抑制法(HBeAb,HBcAb等采用)因受操作時(shí)差所引起的不公平競(jìng)爭(zhēng)等因素的影響,，結(jié)果重復(fù)性較差，質(zhì)量較難控制,。
2.試劑因素
不同批次的ELISA試劑在制作過(guò)程中很難保證質(zhì)量*一致,，即使是通過(guò)批批檢的項(xiàng)目其檢測(cè)結(jié)果也存在差異，因此必須選擇和訂購(gòu)長(zhǎng)批號(hào)的試劑,，并保證保存條件,。嚴(yán)格執(zhí)行這一標(biāo)準(zhǔn)可以避免因試劑批號(hào)改變而重新建立質(zhì)控體系及重新評(píng)估試劑的復(fù)雜過(guò)程，并且能夠保證結(jié)果的穩(wěn)定性,；對(duì)于效期短,、使用率低的試劑，應(yīng)當(dāng)小量分裝,，每次使用則取分裝部分即可,，避免反復(fù)凍融造成試劑的失效。
3.樣本因素
標(biāo)本干擾因素包括內(nèi)源性干擾因素和外源性干擾因素,，前者包括類(lèi)風(fēng)濕因子,、補(bǔ)體、異嗜性抗體,、自身抗體,、溶菌酶等，后者包括標(biāo)本溶血,、標(biāo)本被細(xì)菌污染,、標(biāo)本貯存時(shí)間過(guò)長(zhǎng)、標(biāo)本凝固不全,、冷凍標(biāo)本的反復(fù)凍融等,。
4.操作因素
ELISA操作步驟復(fù)雜，操作不當(dāng)將引起較大的誤差,。加樣,、溫育、洗滌,、顯色,、比色。
5.灰區(qū)的設(shè)置
通常情況下,，ELISA定性實(shí)驗(yàn)以“陽(yáng)性”和“陰性”來(lái)報(bào)告結(jié)果,，兩者間有一條分界線被稱(chēng)為“陽(yáng)性判斷值”(cut-off value,，CO值)，這是定性免疫測(cè)定結(jié)果報(bào)告的依據(jù),。
6.標(biāo)本復(fù)查
ELISA手工檢測(cè)過(guò)程復(fù)雜,，影響因素較多，即使室內(nèi)質(zhì)控在控,，也可能因孔間差異而造成結(jié)果的差異,，因此加大復(fù)查力度是保證結(jié)果準(zhǔn)確性的可靠方法，比如對(duì)HBsAg,、HBeAg,、HCV-Ab、HIV-Ab,、TP-Ab等項(xiàng)目的可疑,、弱陽(yáng)性標(biāo)本及少見(jiàn)模式的檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行復(fù)查。
7.常表示結(jié)果的常用方法
a.定性測(cè)定
b.半定量測(cè)定 結(jié)果一般以滴度表示,。
c.定量測(cè)定 即用已知量的標(biāo)準(zhǔn)品作一系列稀釋后進(jìn)行ELISA測(cè)定,，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，結(jié)果以量或單位表示,。在ELISA定量檢測(cè)中每一塊反應(yīng)板都必須繪制相應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)曲線,。
