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ELISA實(shí)驗(yàn)步驟少，流程短,，購(gòu)買的即用型試劑盒也都有指導(dǎo)性很強(qiáng)的操作說明書,，單次實(shí)驗(yàn) 3-6 小時(shí)即可得到結(jié)果，實(shí)驗(yàn)小白也可以很快上手,。
2 樣品及試劑準(zhǔn)備
按照說明書要求選取和處理樣品,，如血清樣品應(yīng)避免使用溶血或凝固不全的樣品,。
樣品稀釋時(shí)，應(yīng)首先保證樣品已恢復(fù)至室溫,，選用一次性樣品稀釋板稀釋樣品,，然后用排槍轉(zhuǎn)移至ELISA板，保證樣品孵育時(shí)間一致,。禁止使用具有吸附性的細(xì)胞培養(yǎng)板,。
合理安排檢測(cè)量，避免ELISA板過多,，造成洗板等待時(shí)間過長(zhǎng),。
配置洗滌液的蒸餾水或去離子水也需提前回溫。若環(huán)境溫度較低,，可置于25℃恒溫箱內(nèi)回溫,。
No.3 操作注意事項(xiàng)
吸取液體時(shí)選用的移液器量程和所需量接近,，添加通用試劑時(shí)可反向移液,，減小誤差。
樣品開蓋時(shí)盡量遠(yuǎn)離稀釋板,，防止液滴迸濺到稀釋板孔中,。
轉(zhuǎn)移樣品時(shí)稀釋板在上，ELISA板在下,，防止交叉污染,。
加液結(jié)束后加蓋封板膜，使用恒溫恒濕培養(yǎng)箱（注意要提前打開培養(yǎng)箱,，確保孵育時(shí)到達(dá)所需溫度）,，若培養(yǎng)箱不能保證恒濕條件，可自制濕盒,，避免培養(yǎng)箱內(nèi)過于干燥,，致使孔內(nèi)樣品蒸發(fā)。
洗滌時(shí)可使用自動(dòng)洗板機(jī)或多通道移液器
手動(dòng)洗板時(shí),，快速翻轉(zhuǎn)ELISA板將孔內(nèi)溶液甩出,，避免孔間交叉污染。
每次加入洗滌液后,，輕輕震蕩ELISA板后甩出洗滌液,，確保洗滌充分。
最后一次洗滌去除洗滌液前，確保下一步要添加的試劑可直接使用,，勿使ELISA板處于干燥狀態(tài)下的時(shí)間超過一定時(shí)限,。
最后一次洗滌后，將ELISA板置于吸水紙上輕輕拍干,。
底物溶液需避光放置,，加樣時(shí)動(dòng)作迅速，板間加樣時(shí)間差距不宜過大,。室溫下避光孵育,。
加終止液時(shí)動(dòng)作迅速，加完后充分混勻再讀取數(shù)值,。
加入終止液后5分鐘內(nèi)完成讀數(shù),，避免因反應(yīng)時(shí)間過長(zhǎng)，影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性,。
讀數(shù)前打開酶標(biāo)儀，確保酶標(biāo)儀充分預(yù)熱通過自檢,，使結(jié)果更穩(wěn)定,。
酶標(biāo)儀需定期校準(zhǔn)，避免讀數(shù)存在過大偏差,。
? 嚴(yán)格按照規(guī)定的時(shí)間和溫度進(jìn)行溫育以保證準(zhǔn)確結(jié)果,。所有試劑都必須在使用前達(dá)到室溫 20-25℃。使用后立即冷藏保存試劑,。
? 試劑盒嚴(yán)格按照說明書規(guī)定溫度（一般2-8℃）保存,。
? 使用微量移液器時(shí)，吸取不同的液體后要注意更換槍頭,，防止污染,。
? 消除板底殘留的液體和手指印，否則影響 OD 值,。
? 避免試劑和標(biāo)本的交叉污染以免造成錯(cuò)誤結(jié)果,。
? 在儲(chǔ)存和溫育時(shí)避免強(qiáng)光直接照射。和檢測(cè)裝置,。
ELISA實(shí)驗(yàn)現(xiàn)在已成為實(shí)驗(yàn)室最為常見的實(shí)驗(yàn),，幾乎人人都能做，但真正做好的沒有幾個(gè),，究其原因就是步驟比較簡(jiǎn)單,，一學(xué)就會(huì)，卻往往抓不往關(guān)鍵,，一個(gè)小環(huán)節(jié)的錯(cuò)誤,，最終會(huì)影響整個(gè)實(shí)驗(yàn)結(jié)果，注意以上這些可以幫助我們高效高質(zhì)的完成ELISA試驗(yàn)。
