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TGF-β ELISA試劑盒(種屬樣本:小鼠血清,、血漿、組織等)
試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA),。往預先包被小鼠轉化生長因子β(TGF-β)捕獲抗體的包被微孔中,,依次加入標本、標準品,、HRP標記的檢測抗體,,經過溫育并*洗滌,。用底物TMB顯色,,TMB在過氧化物酶的催化下轉化成藍色,并在酸的作用下轉化成最終的黃色,。顏色的深淺和樣品中的小鼠轉化生長因子β(TGF-β)呈正相關,。用酶標儀在450nm 波長下測定吸光度(OD 值),計算樣品濃度。
操作步驟
1. 從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條,,剩余板條用自封袋密封放回4℃,。
2. 設置標準品孔和樣本孔,標準品孔各加不同濃度的標準品50μL,;
3. 樣本孔中加入待測樣本50μL,;空白孔不加。
4. 除空白孔外,,標準品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶(HRP)標記的檢測抗體100μL,,用封板膜封住反應孔,37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min,。
5. 棄去液體,,吸水紙上拍干,每孔加滿洗滌液(350μL),,靜置1min,,甩去洗滌液,吸水紙上拍干,,如此重復洗板5次(也可用洗板機洗板),。
6. 每孔加入底物A、B各50μL,,37℃避光孵育15min,。
每孔加入終止液50μL,15min內,,在450nm波長處測定各孔的OD值,。
試劑盒性能
1. 檢測范圍:25 pg/mL – 800 pg/mL。
2. 靈敏度:檢測濃度小于1.0 pg/mL,。
3. 特異性:不與其它可溶性結構類似物交叉反應,。
4. 重復性:板內變異系數小于10% ,板間變異系數小于15% ,。
需要而未提供的試劑和器材
1. 酶標儀(450nm)
2. 高精度加樣器及槍頭:0.5-10uL,、2-20uL、20-200uL,、200-1000uL
3. 37℃恒溫箱
4. 蒸餾水或去離子水