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小鼠β-聯(lián)蛋白(β-Catenin)ELISA試劑盒檢測(cè)原理
實(shí)驗(yàn)原理:
將目標(biāo)抗體包被于96孔微孔板中,,制成固相載體,,向微孔中分別加入標(biāo)準(zhǔn)品或標(biāo)本,,其中的目標(biāo)連接于固相載體上的抗體結(jié)合,,然后加入微生物化的目標(biāo)抗體,,將未結(jié)合的生物素抗體洗凈后,,加入HRP標(biāo)記和親和素,,再次*洗滌后加入TMB底物顯色,。TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色,,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的目標(biāo)呈正相關(guān),。用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度(O.D.值),,計(jì)算樣品濃度。
試劑盒操作步驟:
實(shí)驗(yàn)所需自備試驗(yàn)器材:
1. 酶標(biāo)儀(450nm)
2. 高精度加樣器及槍頭:0.5-10uL,、2-20uL,、20-200uL,、200-1000uL
3. 37℃恒溫箱
4. 蒸餾水或去離子水
實(shí)驗(yàn)結(jié)果計(jì)算:
繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線:在Excel工作表中,以標(biāo)準(zhǔn)品濃度作橫坐標(biāo),,對(duì)應(yīng)OD值作縱坐標(biāo),,繪制出標(biāo)準(zhǔn)品線性回歸曲線,按曲線方程計(jì)算各樣本濃度值,。
技術(shù)小提示:
1. 當(dāng)混合或重溶蛋白溶液時(shí),,盡量避免起沫。
2. 為了避免交叉感染,,配置不同濃度標(biāo)準(zhǔn)品,、上樣、加不同試劑都需要更換槍頭,。另外不同試劑請(qǐng)分別使用不同的移液槽,。
3. 每次孵育時(shí),請(qǐng)正確使用封板膠可保證結(jié)果的準(zhǔn)確性,。
4. 混合后的顯色底物在上板前應(yīng)為無色,,請(qǐng)避光保存;假如微孔板后,,將由物色變成不同深度的藍(lán)色,。
5. 終止液上板順序應(yīng)同顯色底物上板順序一致;加入終止液后,,孔內(nèi)顏色由藍(lán)變黃,;若孔內(nèi)有綠色,則表明孔內(nèi)液體未混勻,;請(qǐng)充分混合,。
產(chǎn)品有效期:6個(gè)月