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- 霍經(jīng)理
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測定意義:超氧陰離子自由基作為生物體代謝過程中產(chǎn)生的一種自由基,,可攻擊生物大分子,,如脂質(zhì),、蛋白質(zhì),、核酸和聚不飽和脂肪酸等,,使其交鏈或者斷裂,,引起細胞結(jié)構(gòu)和功能的破壞,與機體衰老和病變有很密切的關(guān)系,,清除超氧陰離子自由基的研究已經(jīng)得到了廣泛的關(guān)注,。
測定原理:AP-TEMED系統(tǒng)產(chǎn)生超氧陰離子,與鹽酸羥胺反應(yīng)生成NO2-,,NO2-與對氨基苯磺酸和α-萘胺的作用生成紅色的偶氮化合物,,在530nm處有特征吸收峰,樣品對超氧陰離子的清除能力與530nm的吸光值呈負相關(guān),。
需要的儀器,,耗材:天平、低溫離心機,、可見分光光度計/酶標儀,、微量石英比色皿/96孔板、恒溫水浴鍋,。
樣品處理
1. 組織:按照質(zhì)量(g):提取液體積(mL)為 1:5~10 的比例(建議稱取約 0.1g,,加入 1mL 提取液) 加入提取液,冰浴勻漿后于 4℃,,10000g 離心 10min,,取上清置于冰上待測。
2. 細胞:按照細胞數(shù)量(104個):提取液體積(mL)為 500~1000:1 的比例(建議 500 萬細胞加 入 1mL 提取液),,冰浴超聲波破碎細胞(功率 300w,,超聲 3 秒,間隔 7 秒,總時間 3min),;然 后 4℃,,10000g 離心 10min,取上清置于冰上待測,。
3. 培養(yǎng)液或其它液體:直接檢測,。
4. 粉劑藥物可配制成相同濃度,比如 1mg/mL,。