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線粒體呼吸鏈復(fù)合體Ⅳ活性測試盒操作程序
測定意義：線粒體復(fù)合體Ⅳ又稱細(xì)胞色素C氧化酶,，也是線粒體呼吸電子傳遞鏈主路和支路的共有成分,，負(fù)責(zé)催化還原型細(xì)胞色素C的氧化，并最終把電子傳遞給氧,，生成水。
測定原理：還原型細(xì)胞色素C在550nm有特征光吸收,，線粒體復(fù)合體Ⅳ催化還原型細(xì)胞色素C生成氧化型細(xì)胞色素C,，因此550nm光吸收下降速率能夠反映線粒體復(fù)合體Ⅳ酶活性。
需要的儀器,，耗材:可見分光光度計/酶標(biāo)儀,、臺式離心機(jī),、水浴鍋、可調(diào)式移液器,、微量石英比色皿/96孔板,、研缽、冰和蒸餾水,。
樣本處理
1. 稱取約 0.1g 組織或收集 500 萬細(xì)胞,，加入 1.0 mL 提取液，用冰浴勻漿器或研缽勻漿,。4 ℃ 600g 離心 10min,。
2. 將上清液移至另一離心管中，4 ℃ 11000g 離心 15min,。
3. 上清液即胞漿提取物,，可用于測定從線粒體泄漏的復(fù)合體Ⅳ（此步可選做，可以判斷線粒體提取效果）,。
4. 在沉淀中加入 400uL 提取液,，超聲波破碎（功率 20%，超聲 5 秒,，間隔 10 秒,，重復(fù) 15 次），用于復(fù)合體Ⅳ 酶活性測定,，并且用于蛋白含量測定,。
