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VB3含量檢測,，人維生素B3ELISA試劑盒科研
實(shí)驗(yàn)原理
試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）。往預(yù)先包被人組蛋白H3（H3）捕獲抗體的包被微孔中,，依次加入標(biāo)本,、標(biāo)準(zhǔn)品、HRP標(biāo)記的檢測抗體,，經(jīng)過溫育并*洗滌,。用底物TMB顯色，TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色,，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成終的黃色,。顏色的深淺和樣品中的人組蛋白H3（H3）呈正相關(guān),。用酶標(biāo)儀在450nm 波長下測定吸光度（OD 值），計(jì)算樣品濃度,。
- 嚴(yán)格按照規(guī)定的時間和溫度進(jìn)行溫育以保證準(zhǔn)確結(jié)果,。所有試劑都必須在使用前達(dá)到室溫20-25℃。使用后立即冷藏保存試劑,。
- 洗板不正確可以導(dǎo)致不準(zhǔn)確的結(jié)果,。在加入底物前確保盡量吸干孔內(nèi)液體。溫育過程中不要讓微孔干燥掉,。
- 消除板底殘留的液體和手指印,，否則影響OD值。
- 底物顯色液應(yīng)呈無色或很淺的顏色,，已經(jīng)變藍(lán)的底物液不能使用,。
- 避免試劑和標(biāo)本的交叉污染以免造成錯誤結(jié)果。
- 在儲存和溫育時避免強(qiáng)光直接照射,。
- 平衡至室溫后再打開密封袋以防水滴凝聚在冷板條上,。
- 任何反應(yīng)試劑不能接觸漂白溶劑或漂白溶劑所散發(fā)的強(qiáng)烈氣體。任何漂白成分都會破壞試劑盒中反應(yīng)試劑的生物活性,。
- 不能使用過期產(chǎn)品,。
- 如果可能傳播疾病，所有的樣品都應(yīng)管理好,，按照規(guī)定的程序處理樣品和檢測裝置,。
操作步驟
- 從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條，剩余板條用自封袋密封放回4℃,。
- 設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔,，標(biāo)準(zhǔn)品孔各加不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品50μL；
- 樣本孔中加入待測樣本50μL,；空白孔不加,。
- 除空白孔外，標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶（HRP）標(biāo)記的檢測抗體100μL,，用封板膜封住反應(yīng)孔,，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。
- 棄去液體,，吸水紙上拍干,，每孔加滿洗滌液（350μL），靜置1min,，甩去洗滌液,，吸水紙上拍干,，如此重復(fù)洗板5次（也可用洗板機(jī)洗板）,。
- 每孔加入底物A,、B各50μL，37℃避光孵育15min,。
- 每孔加入終止液50μL,，15min內(nèi)，在450nm波長處測定各孔的OD值,。
實(shí)驗(yàn)結(jié)果計(jì)算
以所測標(biāo)準(zhǔn)品的OD值為橫坐標(biāo),，標(biāo)準(zhǔn)品的濃度值為縱坐標(biāo)，在坐標(biāo)紙上或用相關(guān)軟件繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,，并得到直線回歸方程,，將樣品的OD值代入方程，計(jì)算出樣品的濃度,。
1,、液體類標(biāo)本（細(xì)胞培養(yǎng)上清、組織勻漿,、血清,、血漿、尿液,、胸水,、腹水、腦脊液等）,；
2,、樣本保存：請盡早檢測，2-8℃保存一天,；需更長時間須冷凍（-20℃或-70℃）保存,。如需周期收集樣本，請將樣本及時分裝標(biāo)號后,，置-20℃或-70℃保存,；
3、請?zhí)崆案嬖V我們：您樣本的種屬,、樣本數(shù)量,、待測指標(biāo)及其他特殊要求。
