聯(lián)系電話
上海仁捷生物科技有限公司
中級會員·9年
- 聯(lián)系人：
- 霍經理
- 電話：
- 021-60346444
- 手機：
- 17302193538
- 地址：
- 上海市楊浦區(qū)鐵嶺路32號1519-10室
- 個性化：
- www.shrjkit.com
- 網址：
- www.shrjbio.com
掃一掃訪問手機商鋪
H2O2 ELISA檢測試劑盒（種屬：人）
本試劑僅供研究使用 目的：本試劑盒用于測定人血清、血漿,、組織勻漿及相關液體樣本中過氧化氫（H2O2）的含量,。
實驗原理：
本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中人過氧化氫（H2O2）水平。用純化的人過氧化氫（H2O2）捕獲抗體包被微孔板,，制成固相抗體,，往包被的微孔中依次加入人過氧化氫（H2O2），再與HRP標記的檢測抗體結合,，形成抗體-抗原-酶標抗體復合物,，經過*洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉化成藍色,，并在酸的作用下轉化成終的黃色,。顏色的深淺和樣品中的人過氧化氫（H2O2）呈正相關。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度（OD值）,，通過標準曲線計算樣品中人過氧化氫（H2O2）含量,。
試劑盒組成：
試劑盒組成 | 48孔配置 | 96孔配置 | 保存 |
說明書 | 1份 | 1份 |
|
封板膜 | 2片 | 2片 |
|
密封袋 | 1個 | 1個 |
|
酶標包被板 | 1×48 | 1×96 | 2-8℃保存 |
標準品 | 0.3ml×6管 | 0.3ml×6管 | 2-8℃保存 |
酶標試劑 | 5 ml×1瓶 | 10 ml×1瓶 | 2-8℃保存 |
樣品稀釋液 | 3 ml×1瓶 | 6 ml×1瓶 | 2-8℃保存 |
顯色劑A液 | 3 ml×1瓶 | 6 ml×1瓶 | 2-8℃保存 |
顯色劑B液 | 3 ml×1瓶 | 6 ml×1瓶 | 2-8℃保存 |
終止液 | 3 ml×1瓶 | 6 ml×1瓶 | 2-8℃保存 |
20×濃縮洗滌液 | 15ml×1瓶 | 25ml×1瓶 | 2-8℃保存 |
注：標準品濃度依次為：80、40,、20,、10、5,、0 μmol/L.
樣本處理及要求：
1. 血清：室溫血液自然凝固10-20分鐘,，離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清,，保存過程中如出現沉淀,，應再次離心。
2. 血漿：應根據標本的要求選擇EDTA或檸檬酸鈉作為抗凝劑,，混合10-20分鐘后,，離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清,，保存過程中如有沉淀形成,，應該再次離心。
3. 尿液：用無菌管收集,，離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）,。仔細收集上清，保存過程中如有沉淀形成,，應再次離心,。胸腹水、腦脊液參照實行,。
4. 細胞培養(yǎng)上清：檢測分泌性的成份時,，用無菌管收集。離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）,。仔細收集上清,。檢測細胞內的成份時，用PBS（PH7.2-7.4）稀釋細胞懸液,，細胞濃度達到100萬/ml左右,。通過反復凍融，以使細胞破壞并放出細胞內成份,。離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）,。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成,，應再次離心,。
5. 組織標本：切割標本后，稱取重量,。加入一定量的PBS,，PH7.4,。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆谩吮救诨笕匀槐３?-8℃的溫度,。加入一定量的PBS（PH7.4）,，用手工或勻漿器將標本勻漿充分。離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）,。仔細收集上清,。分裝后一份待檢測，其余冷凍備用,。
6. 標本采集后盡早進行提取,，提取按相關文獻進行，提取后應盡快進行實驗,。若不能馬上進行試驗,，可將標本放于-20℃保存，但應避免反復凍融.
7. 不能檢測含NaN3的樣品,，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性,。
操作步驟
- 標準品的加樣：設置標準品孔和樣本孔，標準品孔各加不同濃度的標準品50μL,；,。
- 加樣：分別設空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其余各步操作相同）,、待測樣品孔,。在酶標包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測樣品10μl（樣品終稀釋度為5倍）,。加樣將樣品加于酶標板孔底部,，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻,。
- 加酶：每孔加入酶標試劑100μl,，空白孔除外。
- 溫育：用封板膜封板后置37℃溫育60分鐘,。
- 配液：將20倍濃縮洗滌液用蒸餾水20倍稀釋后備用,。
- 洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體,，甩干,，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去,，如此重復5次,，拍干。
- 顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl,，輕輕震蕩混勻,，37℃避光顯色15分鐘.
- 終止：每孔加終止液50μl，終止反應（此時藍色立轉黃色）,。
- 測定：以空白孔調零,，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）,。 測定應在加終止液后15分鐘以內進行,。
注意事項：
- 試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應在室溫平衡15-30分鐘后方可使用，酶標包被板開封后如未用完,，板條應裝入密封袋中保存,。
- 濃洗滌液可能會有結晶析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶,，洗滌時不影響結果,。
- 各步加樣均應使用加樣器，并經常校對其準確性,，以避免試驗誤差,。一次加樣時間控制在5分鐘內，如標本數量多,，推薦使用排槍加樣,。
- 請每次測定的同時做標準曲線，做復孔,。如標本中待測物質含量過高（樣本OD值大于標準品孔孔的OD值）,，請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數（n倍）后再測定，計算時請后乘以總稀釋倍數（×n×5）,。
- 封板膜只限一次性使用,，以避免交叉污染。
- 底物請避光保存,。
- 嚴格按照說明書的操作進行,，試驗結果判定必須以酶標儀讀數為準.
- 所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理,。
- 本試劑不同批號組分不得混用,。
10. 如與英文說明書有異，以英文說明書為準,。
計算：
以標準物的濃度為橫坐標,，OD值為縱坐標，
在坐標紙上繪出標準曲線,，根據樣品的OD
值由標準曲線查出相應的濃度,；再乘以稀釋
倍數；或用標準物的濃度與OD值計算出標
準曲線的直線回歸方程式,，將樣品的OD值
代入方程式,，計算出樣品濃度,，再乘以稀釋
倍數，即為樣品的實際濃度,。
（此圖僅供參考）
試劑盒性能：
1.樣品線性回歸與預期濃度相關系數R值為0.95以上,。
2.批內變異系數與批間變異系數應分別小于10%和15% 。
檢測范圍：
2.5 μmol/L - 80 μmol/L
靈敏度：
低檢測濃度小于0.1 μmol/L
保存條件及有效期：
1.試劑盒保存： 2-8℃,。
2．有效期： 6個月
