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人PGD2定量檢測方法,，前列腺素D2ELISA試劑盒
l 本試劑盒用于體外定量檢測血清、血漿,、組織,、細胞上清及相關液體樣本中人前列腺素D2(PGD2)的含量。
l 有效期：6個月
l 保存條件：2-8℃
人前列腺素D2(PGD2)ELISA試劑盒實驗原理
試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯免疫吸附試驗（ELISA）,。往預先包被人前列腺素D2(PGD2)捕獲抗體的包被微孔中,，依次加入標本、標準品,、HRP標記的檢測抗體,，經過溫育并*洗滌。用底物TMB顯色,，TMB在過氧化物酶的催化下轉化成藍色，并在酸的作用下轉化成終的黃色,。顏色的深淺和樣品中的人前列腺素D2(PGD2)呈正相關,。用酶標儀在450nm 波長下測定吸光度（OD 值），計算樣品濃度,。
人前列腺素D2(PGD2)ELISA試劑盒樣本處理及要求
1. 血清：全血標本請于室溫放置2小時或4℃過夜后于1000g離心20分鐘,，取上清即可檢測，或將標本放于-20℃或-80℃保存,，但應避免反復凍融,。
2. 血漿：可用EDTA或肝素作為抗凝劑，標本采集后30分鐘內于2 - 8°C 1000g離心20分鐘,，或將標本放于-20℃或-80℃保存,，但應避免反復凍融。
3. 細胞培養(yǎng)物上清或其它生物標本：1000g離心20分鐘,，取上清即可檢測,，或將標本放于-20℃或-80℃保存，但應避免反復凍融,。
注：標本溶血會影響后檢測結果,，因此溶血標本不宜進行此項檢測。
需要而未提供的試劑和器材
1. 酶標儀（450nm）
2. 高精度加樣器及槍頭：0.5-10uL,、2-20uL,、20-200uL、200-1000uL
3. 37℃恒溫箱
4. 蒸餾水或去離子水
人前列腺素D2(PGD2)ELISA試劑盒問題解析：
1.試劑的選擇：選擇優(yōu)良試劑大家都是知道的,，但是在檢測之前還應該提前半個小時將試劑拿到常溫下進行解凍,。
2.加樣中可能遇到的問題：在做血清或是血漿用于檢測試劑的時候，會碰到血清血漿不好分離的情況,，這個時候的解決辦法是先放在常溫中1到2小時,，然后在進行離心處理
3.洗板時容易造成誤差： 因為洗板是人工洗的,，所以判斷什么時候洗干凈了也是人為判斷的，這個時候帶有主觀色彩,，所以多清洗幾次,，還有就是在洗的時候孔與孔之間的液體容易交叉流動
4.顯色問題： 使用了過期的顯色劑或者是顯色劑用過后放置時間太長，都有可能造成顯色劑不顯色,。所以在進行顯色反應的時候,，要先查看顯色劑本身的情況
5.終止反應：在加終止劑的時候由于傾倒速度快，差生氣泡,，造成假陽性結果,。所以在倒終止劑的時候要緩慢倒
6.讀板：讀板的時候首先應該保證板的清潔干凈
試劑準備
試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應在室溫平衡后方可使用。
20×洗滌緩沖液的稀釋：蒸餾水按1：20稀釋,，即1份20×洗滌緩沖液加19份蒸餾水,。
操作步驟
1. 從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條，剩余板條用自封袋密封放回4℃,。
2. 設置標準品孔和樣本孔,，標準品孔各加不同濃度的標準品50μL；
3. 樣本孔中加入待測樣本50μL,；空白孔不加,。
4. 除空白孔外，標準品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶（HRP）標記的檢測抗體100μL,，用封板膜封住反應孔,，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。
5. 棄去液體,，吸水紙上拍干,，每孔加滿洗滌液（350μL），靜置1min,，甩去洗滌液,，吸水紙上拍干，如此重復洗板5次（也可用洗板機洗板）,。
6. 每孔加入底物A,、B各50μL，37℃避光孵育15min,。
7. 每孔加入終止液50μL,，15min內，在450nm波長處測定各孔的OD值,。
實驗結果計算
以所測標準品的OD值為橫坐標,，標準品的濃度值為縱坐標，在坐標紙上或用相關軟件繪制標準曲線,，并得到直線回歸方程,，將樣品的OD值代入方程,，計算出樣品的濃度。
試劑盒性能
1. 特異性：不與其它可溶性結構類似物交叉反應,。
2. 重復性：板內變異系數小于10% ,，板間變異系數小于15% 。
注釋：本公司所有產品僅用于科研,，不得用于臨床。
