大鼠酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(NADPH)ELISA試劑盒

英文名稱：Rat NADPH ELISA Kit
實驗類型：夾心法
檢測范圍：0.75 U/L – 24 U/L
zui低檢測限：0.1 U/L
應(yīng)用范圍：血清,、血漿、組織勻漿、細(xì)胞培養(yǎng)物上清或其它相關(guān)液體（本產(chǎn)品僅供實驗室科研及非臨床用途）

大鼠酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(NADPH)ELISA試劑盒實驗?zāi)康?/strong>

本試劑盒用于體外定量檢測血清,、血漿,、組織,、細(xì)胞上清及相關(guān)液體樣本中大鼠酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸（NADPH）的含量,。

有效期：6個月

保存條件：2-8℃

實驗原理

試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）。往預(yù)先包被大鼠酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸（NADPH）捕獲抗體的包被微孔中,，依次加入標(biāo)本,、標(biāo)準(zhǔn)品、HRP標(biāo)記的檢測抗體,，經(jīng)過溫育并*洗滌,。用底物TMB顯色，TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色,，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色,。顏色的深淺和樣品中的大鼠酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸（NADPH）呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm 波長下測定吸光度（OD 值），計算樣品濃度,。

大鼠酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(NADPH)ELISA試劑盒組成

備注：

1. 標(biāo)準(zhǔn)品濃度依次為：24,、12、6,、3,、1.5、0 U/L

2. 經(jīng)過大量正常標(biāo)本檢驗,，標(biāo)本的正常濃度值均在試劑盒提供的檢測范圍內(nèi),，實驗過程中直接取50μL樣本上樣即可。當(dāng)有部分樣本值超過zui大標(biāo)準(zhǔn)品濃度時,，可用樣本稀釋液將標(biāo)本進行適當(dāng)稀釋后再進行實驗,。

樣本處理及要求

1. 血清：全血標(biāo)本請于室溫放置2小時或4℃過夜后于1000g離心20分鐘，取上清即可檢測,，或?qū)?biāo)本放于-20℃或-80℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融,。

2. 血漿：可用EDTA或肝素作為抗凝劑,，標(biāo)本采集后30分鐘內(nèi)于2 - 8°C 1000g離心20分鐘，或?qū)?biāo)本放于-20℃或-80℃保存,，但應(yīng)避免反復(fù)凍融,。

3. 細(xì)胞培養(yǎng)物上清或其它生物標(biāo)本：1000g離心20分鐘，取上清即可檢測,，或?qū)?biāo)本放于-20℃或-80℃保存,，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。

注：標(biāo)本溶血會影響zui后檢測結(jié)果,，因此溶血標(biāo)本不宜進行此項檢測,。

需要而未提供的試劑和器材

1. 酶標(biāo)儀（450nm）

2. 高精度加樣器及槍頭：0.5-10uL、2-20uL,、20-200uL,、200-1000uL

3. 37℃恒溫箱

4. 蒸餾水或去離子水

試劑準(zhǔn)備

試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡后方可使用。

20×洗滌緩沖液的稀釋：蒸餾水按1：20稀釋,，即1份20×洗滌緩沖液加19份蒸餾水,。

操作步驟

1. 從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條，剩余板條用自封袋密封放回4℃,。

2. 設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔,，標(biāo)準(zhǔn)品孔各加不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品50μL；

3. 樣本孔中加入待測樣本50μL,；空白孔不加,。

4. 除空白孔外，標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶（HRP）標(biāo)記的檢測抗體100μL，用封板膜封住反應(yīng)孔,，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min,。

5. 棄去液體，吸水紙上拍干,，每孔加滿洗滌液（350μL）,，靜置1min，甩去洗滌液,，吸水紙上拍干,，如此重復(fù)洗板5次（也可用洗板機洗板）。

6. 每孔加入底物A,、B各50μL,，37℃避光孵育15min。

7. 每孔加入終止液50μL,，15min內(nèi),，在450nm波長處測定各孔的OD值。