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試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）。往預(yù)先包被豬白細(xì)胞介素1（IL-1）捕獲抗體的包被微孔中,，依次加入標(biāo)本、標(biāo)準(zhǔn)品,、HRP標(biāo)記的檢測(cè)抗體，經(jīng)過溫育并*洗滌。用底物TMB顯色,，TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色,。顏色的深淺和樣品中的豬白細(xì)胞介素1（IL-1）呈正相關(guān),。用酶標(biāo)儀在450nm 波長下測(cè)定吸光度（OD 值），計(jì)算樣品濃度,。

操作步驟

1.   從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條,，剩余板條用自封袋密封放回4℃。
2.   設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔,，標(biāo)準(zhǔn)品孔各加不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品50μL,；
3.   樣本孔中加入待測(cè)樣本50μL；空白孔不加,。
4.   除空白孔外,，標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶（HRP）標(biāo)記的檢測(cè)抗體100μL，用封板膜封住反應(yīng)孔,，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min,。
5.   棄去液體，吸水紙上拍干,，每孔加滿洗滌液（350μL）,，靜置1min，甩去洗滌液,，吸水紙上拍干,，如此重復(fù)洗板5次（也可用洗板機(jī)洗板）。
6.   每孔加入底物A,、B各50μL,，37℃避光孵育15min。
7.   每孔加入終止液50μL,，15min內(nèi),，在450nm波長處測(cè)定各孔的OD值。

實(shí)驗(yàn)結(jié)果計(jì)算

以所測(cè)標(biāo)準(zhǔn)品的OD值為橫坐標(biāo),，標(biāo)準(zhǔn)品的濃度值為縱坐標(biāo),，在坐標(biāo)紙上或用相關(guān)軟件繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，并得到直線回歸方程,，將樣品的OD值代入方程,，計(jì)算出樣品的濃度。

試劑盒性能

•  檢測(cè)范圍：5 pg/mL – 160 pg/mL,。
•  靈敏度：zui低檢測(cè)濃度小于1.0 pg/mL,。
•  特異性：不與其它可溶性結(jié)構(gòu)類似物交叉反應(yīng),。
•  重復(fù)性：板內(nèi)變異系數(shù)小于10% ，板間變異系數(shù)小于15% ,。
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