日韩av大片在线观看欧美成人不卡|午夜先锋看片|中国女人18毛片水多|免费xx高潮喷水|国产大片美女av|丰满老熟妇好大bbbbbbbbbbb|人妻上司四区|japanese人妻少妇乱中文|少妇做爰喷水高潮受不了|美女人妻被颜射的视频,亚洲国产精品久久艾草一,俄罗斯6一一11萝裸体自慰,午夜三级理论在线观看无码

皮質(zhì)醇ELISA試劑盒常見的定量方法

測定原理：現(xiàn)在皮質(zhì)醇ELISA試劑盒除非是測定抗體的以外，一般使用的是雙抗體夾心法,，此種方法大多數(shù)用的是增強的雙抗體夾心法,，即使用生物素-親和素系統(tǒng)，還有少數(shù)的指標可能使用競爭法,，這類方法適用于半抗原的測定,。

具有復(fù)雜結(jié)構(gòu)的多表位蛋白抗原，其雙抗體夾心法中的一個抗體必須用單抗,，否則背景很高,。當然如果兩個都是單抗(這兩個單抗針對不同表位)，那么測定的線性范圍就較寬,，試劑盒性能就較好,；一個用單抗，一個用多抗,，測定的靈敏度會較高,。

某些簡單的化合物用皮質(zhì)醇ELISA試劑盒測定時，因為沒有兩個或以上的表位,，一般只能作為半抗原,，只能用競爭法測定。如果你發(fā)現(xiàn)有測定簡單化合物(如雌激素,、NO,、地高辛等)用雙抗體夾心法作測定原理時，這個試劑盒你就要懷疑了,。另外還要說明一步雙抗體夾心法與兩步雙抗體夾心法的區(qū)別,。

一步雙抗體夾心法的吸光度-劑量曲線呈鐘形，隨著待則標本中抗原濃度的增加而升高至一定程度后,，測定吸光度即隨抗原濃度的增加而開始下降直至不顯色,，即所謂的“鉤狀效應(yīng)”(hookeHect)，也就是我們在免疫沉淀試驗中所稱的“帶現(xiàn)象”(zonephenomenon),。所以當使用一步雙抗體夾心法時,，樣品濃度太高，有時會出現(xiàn)測不出來的現(xiàn)象,，此時要作適當?shù)南♂尣拍軠蚀_測定,。

皮質(zhì)醇ELISA試劑盒的組成：用雙抗體夾心法作為測定的方法時,，試劑盒的組成一般包括：已包被單抗的酶標板：一塊，有96孔的,，也有48孔的,，可拆缷，外面有鋁箔袋密封,，打開后有干燥劑,，實驗時暫未使用的酶標條要連帶干燥劑密封好，放在4℃冰箱中妥善保存,。

皮質(zhì)醇ELISA試劑盒操作步驟

1,、準備：從冰箱取出試劑盒，室溫復(fù)溫平衡30分鐘,。

2,、配液：用蒸餾水將20倍濃縮洗滌液稀釋成原倍的洗滌液。

3,、加標準品和待測樣本：取足夠數(shù)量的酶標包被板,，固定于框架上，分別設(shè)置標準品孔,、待測樣本孔和空白對照孔,，記錄各孔位置，在標準品孔中加入標準品50μL,；待測樣本孔中先加入待測樣本10μL,，再加樣本稀釋液40μL（即樣本稀釋5倍）；空白對照孔不加,。

4,、溫育：37℃水浴鍋或恒溫箱溫育30min。

5,、洗板：棄去液體,，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液,，靜置1min,，甩去洗滌液，吸水紙上拍干,，如此重復(fù)洗板4次（也可用洗板機按說明書操作洗板）。

6,、加酶標工作液：每孔加入酶標工作液50μL,，空白對照孔不加。

7,、溫育：重復(fù)4的操作,。

8,、洗板：重復(fù)5的操作。

9,、顯色：每孔先加入顯色劑A 液50μL,，再加入顯色劑B液 50μL，37℃避光顯色15min,。

10,、終止：取出酶標板，每孔加終止液50μL,，終止反應(yīng)（顏色由藍色立轉(zhuǎn)黃色）,。

11、測定：以空白孔調(diào)零,，在終止后15分鐘內(nèi),，用450nm波長測量各孔的吸光值（OD值）。

12,、計算：根據(jù)標準品的濃度及對應(yīng)的OD值,，計算出標準曲線的直線回歸方程，再根據(jù)樣本的OD值,，在回歸方程上計算出對應(yīng)的樣品濃度,，也可以使用各種應(yīng)用軟件來計算。zui終濃度為實際測定濃度乘以稀釋倍數(shù),。