目錄:愛必信(上海)生物科技有限公司>>細(xì)胞生物學(xué)>>細(xì)胞檢測(cè)>> abs9588支原體檢測(cè)試劑盒(PCR法)
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更新時(shí)間:2025-02-08 15:53:29瀏覽次數(shù):1035評(píng)價(jià)
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供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 規(guī)格 | 50T |
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貨號(hào) | abs9588 | 應(yīng)用領(lǐng)域 | 化工,生物產(chǎn)業(yè),制藥 |
描述:
支原體污染會(huì)對(duì)細(xì)胞各個(gè)方面都造成不良影響,,已經(jīng)成為細(xì)胞培養(yǎng)中高度重視的問題,因此,,定期進(jìn)行支原體污染檢測(cè)是十分必要的,。本支原體檢測(cè)試劑盒是采用PCR方法,特異性的檢測(cè)各種培養(yǎng)細(xì)胞生物材料(如細(xì)胞培養(yǎng)物,、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分泌物,、動(dòng)物血清等)中支原體的污染。
試劑盒使用的混合引物是針對(duì)支原體16s rRNA序列的保守區(qū)域設(shè)計(jì)的特異性引物,,可直接使用細(xì)胞培養(yǎng)液作為PCR模板,,特異性擴(kuò)增支原體DNA,搭配配套的Mycoplasma PCR Mix(2×)一小時(shí)內(nèi)即可完成,,本試劑盒檢測(cè)靈敏度高,,可檢測(cè)低至20個(gè)拷貝的支原體。
使用方法:
1,、樣品準(zhǔn)備:取適量待檢細(xì)胞培養(yǎng)上清于潔凈的PCR管中,,利用PCR儀95℃熱處理5 min后作為模板。血清樣本可利用Mycoplasma Free Water稀釋后,,取適量樣本于潔凈的PCR管中,,利用PCR儀95℃熱處理5 min后作為模板;
2,、PCR體系配制:每次實(shí)驗(yàn)需設(shè)置陰性對(duì)照(將1 μL待檢樣品換成等量的Mycoplasma Free Water)與陽性對(duì)照(在1 μL待檢樣品中加入0.5 μL Positive Control后一起作為Template),,實(shí)驗(yàn)時(shí)戴一次性口罩與手套,謹(jǐn)慎操作,,防止操作不當(dāng)引入外源支原體污染,;
組分 | 體積 |
Template | 1ul |
Mycoplasma Primer Mix | 2ul |
Mycoplasma PCR Mix(2×) | 10ul |
Mycoplasma Free Water | To 20ul |
3、PCR程序設(shè)置:
Step | Temperature | Time | Cycles |
Initial Denaturation | 98℃ | 2 min | 1 |
Denaturation | 98℃ | 20 S | 30 |
Annealing | 56℃ | 25 S | |
Extension | 72℃ | 10 S | |
Final extension | 72℃ | 5 min | 1 |
Hold | 4-16℃ | Forever |
4,、凝膠電泳:取10 μL PCR產(chǎn)物,,使用1%瓊脂糖凝膠進(jìn)行電泳檢測(cè);
5,、結(jié)果分析:每次實(shí)驗(yàn)通過與陰性對(duì)照,、陽性對(duì)照檢測(cè)結(jié)果比較確認(rèn)樣品支原體污染情況,陽性條帶大小500 bp左右,。如陰性對(duì)照檢測(cè)結(jié)果中有條帶很有可能是PCR體系中出現(xiàn)污染,建議重新實(shí)驗(yàn)確認(rèn)結(jié)果,。如有必要,,也可對(duì)PCR產(chǎn)物進(jìn)行常規(guī)測(cè)序,,以確定具體的支原體種屬。
注意事項(xiàng):
1,、本試劑盒可以檢測(cè)M.orale,,M.arginini,M.bovis,,M.fermentans,,M.gallisepticum,M.hominis,,M.pirum,,Ureaplasma spp,M.hyorhinis,,M.pneumoniae,,A.laidlawii等至少11種以上支原體污染。
2,、所有試劑在使用前于冰上解凍好,、混勻,使用完畢后于-20℃保存,。
3,、每次實(shí)驗(yàn)必須設(shè)置陰性對(duì)照、陽性對(duì)照,,實(shí)驗(yàn)組建議設(shè)置樣品模板梯度,。
4、操作時(shí)必須佩戴口罩,,嚴(yán)格按照PCR操作標(biāo)準(zhǔn),,防止引入外源污染影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。
5,、為了確保細(xì)胞實(shí)驗(yàn)的可靠性及穩(wěn)定性,,建議定期進(jìn)行支原體污染檢測(cè)。
6,、為了您的安全和健康,,請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。
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