目錄:愛必信(上海)生物科技有限公司>>生化試劑>>植物提取物>> abs60322Lipofect5000 質(zhì)粒轉(zhuǎn)染試劑
CAS | - | 純度 | - |
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分子量 | - | 分子式 | - |
供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 規(guī)格 | 0.5ml,;1.0ml |
貨號 | abs60322 | 應(yīng)用領(lǐng)域 | 生物產(chǎn)業(yè) |
主要用途 | 適用于將質(zhì)粒DNA轉(zhuǎn)染入哺乳動物細(xì)胞 |
產(chǎn)品描述:
Lipofect5000是在研究了國外同類產(chǎn)品性能的基礎(chǔ)上開發(fā)的一款高性能通用型核酸轉(zhuǎn)染試劑,,適用于將質(zhì)粒DNA轉(zhuǎn)染入哺乳動物細(xì)胞,。Lipofect5000具有非常優(yōu)異的轉(zhuǎn)染性能,可轉(zhuǎn)染絕大多數(shù)貼壁細(xì)胞和部分懸浮細(xì)胞,。在貼壁培養(yǎng)的AAV293細(xì)胞中,,Lipofect5000質(zhì)粒DNA(EGFP質(zhì)粒)的轉(zhuǎn)染陽性率可高達(dá)90%以上,即使對于較難轉(zhuǎn)染的RAW264.7細(xì)胞,,Lipofect5000的質(zhì)粒轉(zhuǎn)染陽性率也可高達(dá)70%,。與部分國際品牌相比,Lipofect5000擁有更高的DNA轉(zhuǎn)染性能,,價格也親和,,是進(jìn)行DNA轉(zhuǎn)染實驗的理想選擇,。
產(chǎn)品特點:
1,、可高效轉(zhuǎn)染多種貼壁細(xì)胞和部分懸浮細(xì)胞等,在貼壁細(xì)胞中的轉(zhuǎn)染陽性率可高達(dá)90%以上,。
2,、 顯著的性價比優(yōu)勢,轉(zhuǎn)染性能顯著優(yōu)于部分國際品牌而價格不足其30%,。
產(chǎn)品組分:
Lipofect5000 | Trans buffer |
0.5ml | 25ml |
1ml | 50ml |
應(yīng)用:
適用細(xì)胞系:HeLa,Huh-7,,CCD-14Br,SBC-1,A-172,,NB-1,COS-7,293T,人肝細(xì)胞,,原代大鼠肝細(xì)胞,雞胚胎心肌細(xì)胞等,。
貼壁細(xì)胞轉(zhuǎn)染方法步驟(以24孔板轉(zhuǎn)染質(zhì)粒DNA為例):
A,、細(xì)胞接種:
1、 轉(zhuǎn)染前一天將細(xì)胞鋪板(使用不含抗生素的培養(yǎng)基),每孔1.5-2.0×105個細(xì)胞左右,,使轉(zhuǎn)染時細(xì)胞密度為80%,;
2、最好在轉(zhuǎn)染開始之前更換新鮮的含血清培養(yǎng)基,,以防轉(zhuǎn)染后孵育階段細(xì)胞密度太大,、營養(yǎng)不足導(dǎo)致細(xì)胞死亡。
B,、Lipofect5000/DNA復(fù)合物包裝(該步完成后應(yīng)立即進(jìn)行轉(zhuǎn)染):
1,、在1.5ml無菌離心管中加入50ul Trans buffer,并添加適量的DNA(參見附表),,用移液器輕輕混勻成DNA稀釋液,。
2、使用前混勻轉(zhuǎn)染試劑,,立即往DNA稀釋液中添加適量的轉(zhuǎn)染試劑,,用移液器輕輕混勻。
3,、將Lipofect5000/DNA混合物室溫靜置15分鐘后,,立即轉(zhuǎn)染。
注意:離心管最好使用聚丙烯離心管,。
C,、轉(zhuǎn)染:
1、將步驟B制備的復(fù)合物滴加至細(xì)胞培養(yǎng)孔中,。輕輕晃動培養(yǎng)板以使復(fù)合物均勻分布,。
2、 培養(yǎng)24小時后即可觀察,,但最佳觀察時間為36小時,。如果需要,細(xì)胞培養(yǎng)6-24小時后可以更換新鮮培養(yǎng)基,,但不是必須,。
3、 收獲細(xì)胞,,進(jìn)行后續(xù)實驗,。對于穩(wěn)定轉(zhuǎn)染,在轉(zhuǎn)染24-48小時后,,用選擇培養(yǎng)基傳代培養(yǎng),。
儲存/保存方法:
4-8°C 保存,有效期一年,,使用前請輕輕混勻,。
技術(shù)指標(biāo):
附 貼壁細(xì)胞培養(yǎng)體系推薦初始轉(zhuǎn)染條件:
培養(yǎng)皿 | 96 | 48 | 24 | 12 | 6 | 10cm 皿 | |
表面積(cm2) | 0.35 | 1.0 | 1.9 | 3.8 | 9.6 | 59 | |
復(fù)合物包裝Trans buffer,、試劑、DNA量 | Trans buffer(ul) | 10 | 25 | 50 | 100 | 200 | 1000 |
Lipofect5000 (ul) | 0.25 | 0.5 | 1.2 | 2.4 | 4.8 | 24 | |
1ug/ul plasmid (ul) | 0.15 | 0.3 | 0.8 | 1.5 | 3 | 15 | |
培養(yǎng)基(ml) | 0.1 | 0.25 | 0.5 | 1 | 2 | 10 |
注意事項:
1,、剛開始使用,,建議進(jìn)行細(xì)胞密度優(yōu)化實驗,如可在培養(yǎng)板中分別接種1.5×105,、2.0×105,、2.5×105個細(xì)胞,分別進(jìn)行DNA轉(zhuǎn)染,,以選擇出轉(zhuǎn)染效果較好的細(xì)胞接種密度,。
2、應(yīng)避免轉(zhuǎn)染復(fù)合物中存在血清,,因為血清會干擾轉(zhuǎn)試劑與DNA形成復(fù)合物,,在轉(zhuǎn)染過程中不要向培養(yǎng)基中添加抗生素。
溫馨提示:本產(chǎn)品僅作科研實驗使用,,不支持臨床等研究
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