目錄:愛必信(上海)生物科技有限公司>>生化試劑>>植物提取物>> abs60317核酸共轉(zhuǎn)染試劑
CAS | - | 純度 | - |
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分子量 | - | 分子式 | - |
供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 規(guī)格 | 0.5ml,;1.0ml,;1.5ml |
貨號 | abs60317 | 應(yīng)用領(lǐng)域 | 生物產(chǎn)業(yè) |
主要用途 | 專門用于將質(zhì)粒 DNA、siRNA 或 mimics 共同轉(zhuǎn)染于同一細胞的試劑盒 |
產(chǎn)品介紹:
核酸共轉(zhuǎn)染試劑盒是我們研發(fā)的專門用于將質(zhì)粒 DNA,、siRNA 或 mimics 共同轉(zhuǎn)染于同一細胞的試劑盒。它具有非常好的轉(zhuǎn)染性能,,可將質(zhì)粒 DNA 和 siRNA 高效地共轉(zhuǎn)染于絕大多數(shù)貼壁細胞和原代細胞,。在貼壁細胞中,質(zhì)粒 DNA 轉(zhuǎn)染效率可高達 90%以上,,siRNA 在質(zhì)粒轉(zhuǎn)染陽性細胞中共轉(zhuǎn)染效率可高達 95%以上,。其功能強大,不僅可高效轉(zhuǎn)染質(zhì)粒 DNA 和 siRNA,,還可高效轉(zhuǎn)染 mRNA,、mimics,、反義核酸和各種小分子 DNA。與目前市場上常見的脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染試劑不同,,我們的共轉(zhuǎn)染試劑 采用生物可降解材料配制,,對細胞的毒性很低,轉(zhuǎn)染后 24 小時細胞死亡率不到 10%,。使用也非常方便,,先將轉(zhuǎn)染試劑與質(zhì)粒 DNA 和 siRNA 混合,再將該轉(zhuǎn)染復(fù)合物直接加入培養(yǎng)細胞中,,血清不影響其轉(zhuǎn)染效果,,不必刻意添加或更換培養(yǎng)液,操作十分簡便,。
產(chǎn)品特點:
1,、強大的質(zhì)粒DNA與siRNA共轉(zhuǎn)染性能,可高效轉(zhuǎn)染多種貼壁細胞和原代細胞,,質(zhì)粒DNA轉(zhuǎn)染效率在貼壁細胞中可高達90%以上,,siRNA在質(zhì)粒轉(zhuǎn)染陽性細胞中共轉(zhuǎn)染效率高達95%以上;
2,、共轉(zhuǎn)染功能強大,,不僅可將質(zhì)粒DNA與siRNA共轉(zhuǎn)染于同一細胞,還可共轉(zhuǎn)染mRNA,、mimics,、反義核酸于同一細胞;
3,、極低的細胞毒性:使用可降解生物材料,,細胞毒性低,轉(zhuǎn)染細胞死亡率不到10%,,大大降低了因細胞毒性對實驗結(jié)果的影響,。
操作步驟(以 24 孔板轉(zhuǎn)染為例):
A、 細胞接種:
1,、轉(zhuǎn)染前一天對細胞進行轉(zhuǎn)接,,每孔接種1.5×105個細胞,使轉(zhuǎn)染時細胞密度為80-90%,,且生長良好(非常重要),;
2、 最好在轉(zhuǎn)染開始之前更換新鮮的含血清培養(yǎng)基,,以防轉(zhuǎn)染后孵育階段細胞密度太大,、營養(yǎng)不足導致細胞死亡。
B、試劑A轉(zhuǎn)染復(fù)合物制備(該步完成后應(yīng)立即進行轉(zhuǎn)染):
1,、在1.5 ml無菌離心管中加入50µl無血清培養(yǎng)基,,再加入適量的轉(zhuǎn)染試劑,見附表,。用移液器輕輕混勻,,室溫靜置5分鐘。
2,、在1.5 ml無菌離心管中加入50µl無血清培養(yǎng)基,,再加入適量的DNA,輕輕混勻,,之后再加入適量的siRNA,,見附表。用移液器再次輕輕 混勻,,室溫靜置5分鐘,。
3、將DNA-siRNA-培養(yǎng)基混合物滴加至試劑A-培養(yǎng)基混合物中,,用移液器輕輕混勻,,室溫靜置15~20分鐘,立即轉(zhuǎn)染,。注意:試劑A-培養(yǎng)基混合物和DNA-siRNA-培養(yǎng)基混合物的混合次序非常重要,,切勿顛倒,。注意:離心管最好使用聚丙烯離心管,。
C、轉(zhuǎn)染:
1,、將步驟B制備的轉(zhuǎn)染復(fù)合物滴加至培養(yǎng)基中,,邊加邊輕輕晃動培養(yǎng)板以使復(fù)合物均勻分布。加完后,,立即將培養(yǎng)板轉(zhuǎn)入培養(yǎng)箱繼續(xù)培養(yǎng),。
2、 培養(yǎng)24-48小時后觀察或進行下一步實驗,。
3,、試劑A在培養(yǎng)基中仍有較高的轉(zhuǎn)染效率,因此轉(zhuǎn)染前后不需要換成無血清或低血清培養(yǎng)基,。
附表 1:不同培養(yǎng)體系推薦初始轉(zhuǎn)染條件
培養(yǎng)皿 | 96 孔板 | 48 孔板 | 24 孔板 | 12 孔板 | 6 孔板 | 10cm 皿 | |
培養(yǎng)基,、試劑、核酸量 | 無血清培養(yǎng)基(μl) | 2x10 | 2x25 | 2x50 | 2x100 | 2x200 | 2x1000 |
試劑A (μl) | 0.5 | 1.3 | 2.5 | 5 | 10 | 50 | |
1μg/μl plasmid (μl) | 0.16 | 0.4 | 0.8 | 1.6 | 3.2 | 16 | |
siRNA (pmol) | 3 | 8 | 15 | 30 | 60 | 300 | |
培養(yǎng)基(ml) | 0.1 | 0.25 | 0.5 | 1 | 2 | 10 |
儲存/保存方法:
-20°C 保存,,有效期一年,,使用前請輕輕混勻。
注意事項:
1、剛開始轉(zhuǎn)染,,請務(wù)必進行優(yōu)化實驗,,如24孔板質(zhì)粒轉(zhuǎn)染,每孔質(zhì)粒用量0.8ug,,siRNA用量15pmol,,試劑A可選擇2.0ul、2.5ul,、3.0ul進行優(yōu)化,。或者,,每孔質(zhì)粒用量0.8ug,,試劑A用量2.5ul,siRNA用量選擇10pmol,、15pmol,、20pmol、25pmol進行優(yōu)化,。
2,、在制備DNA-siRNA轉(zhuǎn)染復(fù)合物時,應(yīng)避免體系中存在血清,,因血清會干擾試劑A與DNA,、siRNA形成復(fù)合物。培養(yǎng)體系中盡量不要添加抗生素,,抗生素會導致培養(yǎng)細胞死亡,。
**溫馨提示:本產(chǎn)品僅作科研實驗使用,不支持臨床等研究