目錄:愛必信（上海）生物科技有限公司>>分子生物學>>其它分子生物學試劑>> abs60327SP懸浮細胞質(zhì)粒DNA轉(zhuǎn)染試劑盒
| CAS | - | 純度 | - |
|---|---|---|---|
| 分子量 | - | 分子式 | - |
| 供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 規(guī)格 | 0.1ml;0.5ml;1.0ml;1.5ml |
| 貨號 | abs60327 | 應用領域 | 化工,生物產(chǎn)業(yè),綜合 |
| 主要用途 | 專門用于懸浮細胞質(zhì)粒DNA轉(zhuǎn)染的試劑 |
產(chǎn)品簡介:
該產(chǎn)品是我們研發(fā)團隊在貼壁細胞質(zhì)粒DNA轉(zhuǎn)染試劑的基礎上進一步優(yōu)化研發(fā)成功的專門用于懸浮細胞質(zhì)粒DNA轉(zhuǎn)染的試劑。它具有非常好的轉(zhuǎn)染性能,，可高效轉(zhuǎn)染多種懸浮細胞,，轉(zhuǎn)染效率在懸浮細胞中可高達85%以上（巨噬細胞、EGFP質(zhì)粒）,。與目前市場上常見的脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染試劑不同,，它采用生物可降解材料配制，對細胞的毒性很低，轉(zhuǎn)染后細胞死亡率不到10%,。其使用也非常方便,，先將轉(zhuǎn)染試劑與質(zhì)粒DNA混合，再將轉(zhuǎn)染試劑-DNA復合物直接加入培養(yǎng)細胞中,，血清不影響其轉(zhuǎn)染效果,，不必刻意添加或更換培養(yǎng)液，操作十分簡便,。
產(chǎn)品特點：
1,、較好的細胞轉(zhuǎn)染性能：可高效轉(zhuǎn)染多種懸浮細胞，轉(zhuǎn)染效率可高達85%以上,；
2,、極低的細胞毒性：使用可降解生物材料，細胞毒性低,，轉(zhuǎn)染細胞死亡率不到10%,，大大降低了因細胞毒性對實驗結(jié)果的影響，實驗結(jié)果更為客觀,；
3,、操作簡便，可用于含血清培養(yǎng)基培養(yǎng)細胞的轉(zhuǎn)染,，轉(zhuǎn)染前后不需要更換培養(yǎng)液,。
應用：
適用細胞系：293F，THP-1,、RAW264.7,、BMDM、CHO-S,、Jurkat,， K562、U937,，NB4,、MSCs等。
操作步驟 （以24 孔板轉(zhuǎn)染為例）:
A,、 細胞接種:
1,、 轉(zhuǎn)染前一天或者兩天接種細胞，接種細胞量為2-4×105 個,。
2,、 確保轉(zhuǎn)染時細胞比活度為90%以上，且生長狀態(tài)良好,。
3,、 如果細胞在轉(zhuǎn)染前一天鋪板,，轉(zhuǎn)染時可以不用換液，如果細胞在轉(zhuǎn)染前兩天鋪板,，轉(zhuǎn)染時最好換液,。
B、 SP/DNA轉(zhuǎn)染復合物制備(該步完成后應立即進行轉(zhuǎn)染):
1,、 在1.5 ml無菌離心管中加入50 ul Trans buffer,，再加入適量的DNA，見附表,。用移液器輕輕混勻成DNA稀釋液。
2,、使用前用移液器吹打混勻轉(zhuǎn)染試劑,，立即往DNA稀釋液中加入適量的轉(zhuǎn)染試劑，用移液器輕輕混勻,。
3,、 將SP/DNA復合物室溫靜置15分鐘后，立即轉(zhuǎn)染,。
注意：離心管最好使用聚丙烯離心管,。
C、轉(zhuǎn)染:
1,、將擬轉(zhuǎn)染細胞強烈振蕩20-40秒,，確保培養(yǎng)細胞分散成單細胞懸液，無細胞結(jié)團,；
2,、將步驟B制備的轉(zhuǎn)染復合物滴加至培養(yǎng)基中，邊加邊輕輕晃動培養(yǎng)板,。加完后,，立即將培養(yǎng)板轉(zhuǎn)入培養(yǎng)箱繼續(xù)培養(yǎng)。
3,、 培養(yǎng)24-96小時后收獲,。
4、 SP在培養(yǎng)基中仍有較高的轉(zhuǎn)染效率,，因此轉(zhuǎn)染前后不需要換成無血清或低血清培養(yǎng)基,。因收獲蛋白需要，可以使用懸浮細胞培養(yǎng)專用的無血清培養(yǎng)基,。
附表：不同培養(yǎng)體系推薦初始轉(zhuǎn)染條件
| 培養(yǎng)皿 | 96孔板 | 48孔板 | 24孔板 | 12孔板 | 6孔板 | 10cm皿 | |
| 表面積(cm2) | 0.35 | 1.0 | 1.9 | 3.8 | 9.6 | 59 | |
| Trans buffer,、試劑、DNA量 | Trans buffer (ul) | 10 | 25 | 50 | 100 | 200 | 1000 |
| SP (ul) | 0.25 | 0.6 | 1.2 | 2.4 | 4.8 | 24 | |
| 1ug/ul plasmid (ul) | 0.16 | 0.4 | 0.8 | 1.6 | 3.2 | 16 | |
| 培養(yǎng)基(ml) | 0.10 | 0.25 | 0.50 | 1.0 | 2.0 | 10 | |
保存方法：
2-8℃避光保存,，Trans buffer可保存于2-8℃有效期一年,，使用前請先將本品輕輕混勻,。
注意事項：
、1,、對于24孔板,，轉(zhuǎn)染前接種細胞量以（2-4）x105細胞為宜，轉(zhuǎn)染時細胞生長狀態(tài)應保持良好,，不要有支原體污染,。
2、剛開始轉(zhuǎn)染,，建議進行優(yōu)化實驗,，如24孔板，可將細胞接種3個孔,，每孔接種細胞數(shù)分別為2x105 ,、 3x105 、4x105,，次日質(zhì)粒轉(zhuǎn)染,，轉(zhuǎn)染24小時后觀察轉(zhuǎn)染效果，選擇轉(zhuǎn)染陽性率較高的細胞接種數(shù)進行后續(xù)實驗,。
3,、應避免轉(zhuǎn)染復合物制備體系中存在血清，因血清會干擾 SP 與DNA形成復合物,，轉(zhuǎn)染所用培養(yǎng)基中盡量不要使用抗生素,。
4、為了提高轉(zhuǎn)染效率,，轉(zhuǎn)染后培養(yǎng)板可放于微型振蕩器上培養(yǎng)或每隔1小時人工振蕩1次（非常重要）,。
5、懸浮細胞轉(zhuǎn)染難度大,，且受細胞種類,、細胞密度、細胞生長情況,、培養(yǎng)方法,、操作手法等因素的影響，研究者在轉(zhuǎn)染之前,，應查閱相關文獻,，認真準備轉(zhuǎn)染方案。
6,、本試劑主要用于質(zhì)粒DNA轉(zhuǎn)染,，如需質(zhì)粒DNA、RNA,、siRNA均可轉(zhuǎn)染的試劑,，請選擇SP懸浮細胞核酸轉(zhuǎn)染試劑（abs60325）,。
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