| 描述 | 本產(chǎn)品基于碘化丙啶（Propidium, PI）染色方法分析細(xì)胞周期 和凋亡,。碘化丙啶是一種雙鏈DNA染料，其嵌入雙鏈DNA中可以 產(chǎn)生熒光,，熒光的強(qiáng)度和雙鏈DNA的量成正比,。 在正常細(xì)胞周期中，G0和G1期有1套染色體,，G2和M期細(xì)胞 有2套染色體,，S期介于兩者之間。經(jīng)PI染色后,，處在不同細(xì)胞周 期中的細(xì)胞的熒光強(qiáng)度不同,。假定G0和G1期的細(xì)胞熒光強(qiáng)度為 1，那么G2和M期的細(xì)胞的熒光強(qiáng)度為2,，S期的細(xì)胞介于1和2之 間,。 PI細(xì)胞周期與凋亡試劑盒細(xì)胞凋亡時(shí)，由于細(xì)胞核皺縮和DNA的片段化,，染色時(shí)DNAd的片 段會(huì)從打孔的細(xì)胞膜處丟失,，流式細(xì)胞儀檢測(cè)時(shí)，熒光強(qiáng)度小于 1,，即Sub-G1峰或者凋亡細(xì)胞峰,。 細(xì)胞凋亡也可以用流式細(xì)胞儀觀察細(xì)胞光散射的變化來檢 測(cè)。凋亡前期,，染色質(zhì)皺縮,，細(xì)胞密度增加，前向角光散色顯著 降低,。凋亡后期,，細(xì)胞產(chǎn)生凋亡小體，前向角光散射和側(cè)向角光 散色都顯著降低,。
PI細(xì)胞周期與凋亡試劑盒產(chǎn)品組分： | 編號(hào) | 名稱 | 50T | | A | Propidium Iodide（20×） | 1.25ml | | B | RNase A（50×） | 500 μl | | C | Staining Buffer | 25ml |
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| 使用方法 | 自備耗材和設(shè)備：
1 ml 移液器
100-200 μl 移液器
旋窩混勻儀
流式細(xì)胞儀
PBS
75%乙醇
適用實(shí)驗(yàn)與操作過程：
1,、細(xì)胞準(zhǔn)備 貼壁細(xì)胞：棄細(xì)胞培養(yǎng)液,，胰酶消化，制備單細(xì)胞懸液,， 1000 g離心5分鐘,，棄上清。沉淀用1 ml預(yù)冷的PBS重懸。再次 1000 g離心5分鐘,，棄上清,。 懸浮細(xì)胞：收集細(xì)胞懸液，1000 g離心5分鐘,，棄上清,。沉淀 用1 ml預(yù)冷的PBS重懸。再次1000 g離心5分鐘,，棄上清,。 組織細(xì)胞：將組織塊用剪刀剪成盡量小的小塊后，用0.25%的 胰酶消化0.5-1個(gè)小時(shí),。經(jīng)過200-400目篩網(wǎng)過濾得到單細(xì)胞懸液,。 1000 g離心5分鐘，棄上清,，沉淀用1 ml預(yù)冷的PBS重懸。再次 1000 g離心5分鐘,，棄上清,。 注意，最后一次離心,，棄上清后留50 μl上清，渦旋混勻。
2,、細(xì)胞固定 細(xì)胞沉淀用1 ml -20 ℃預(yù)冷的75%乙醇輕輕混勻，4℃固定2小 時(shí)以上或者過夜,。然后,，1000 g離心5分鐘,，輕輕棄上清,，沉淀用1 ml預(yù)冷的PBS重懸,，1000 g離心5分鐘,，棄上清,。
3,、染色 PI染色工作液配置： 0.5 ml染色緩沖液（C液）中加入25μl PI 染液（A液）和10 μl RNase A（B液）,，混勻待用。每個(gè)細(xì)胞樣品 加入0.5 ml配置好的PI染色工作液,，輕輕混勻重懸細(xì)胞,。37℃,，避 光孵育30分鐘,，直接上流式細(xì)胞儀檢測(cè)（5小時(shí)內(nèi)完成為佳）,。激 發(fā)波長(zhǎng)為488 nm，檢測(cè)紅色熒光。 注意：每個(gè)檢測(cè)細(xì)胞數(shù)不超過1×106個(gè),。 |
| 注意事項(xiàng) | 1,、PI具有毒性,，操作時(shí)應(yīng)注意防護(hù),，保護(hù)眼睛,、避免吸入、并戴一次性手套,。
2、PI存在淬滅現(xiàn)象,，保存和使用過程中注意避光,。 |
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