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Trizol是細胞或組織總RNA抽提試劑,。本產(chǎn)品采用和Invitrogen公司的TRIzol完quan相似的原理和方法,，抽提的方法和步驟wan全相同,。
Trizol的顏色和TRIzol相同,，加入氯仿后上層呈無色，下層呈紅色,，便于吸取上層水相,。
Trizol對動植物細胞或組織及細菌的總RNA抽提均適用。
Trizol抽提所得RNA無DNA和蛋白污染,。一般所得RNA溶于DEPC水后的A260/280值為1.8-2.0,。
裂解細胞或和組織共勻漿時，Trizol可以保持樣品中RNA的完整性,，即可以有效抑制RNA的降解,。
每一百萬細胞用Trizol抽提可得5-15μg RNA；每毫克組織用Trizol抽提可得1-10μg RNA,。產(chǎn)量因細胞和組織不同而異,。
Trizol抽提所得RNA可直接用于Northern，點雜交,，純化mRNA,，體外翻譯，RNase protectionassay,，cDNA克隆,，以及RTPCR；也可以用于基因表達芯片分析,、高通量測序等對RNA質(zhì)量要求較高的情況,。

1、細胞裂解：
   組織樣本： Trizol用量：每 50-100 mg 組織加 1 ml Trizol,，樣品體積不應(yīng)超過 Trizol 體積的 10％。
（1）將動物或植物組織切成小塊,，在液氮中磨碎或用勻漿器勻漿處理,。
（2）將研磨好的組織粉末快速轉(zhuǎn)入裝有 1 ml Trizol 的 2 ml 離心管中，在渦旋振蕩器上迅速振蕩混勻,，置于冰上,， 待所有的樣品研磨完。
（3）裂解產(chǎn)物應(yīng)呈澄清的透明粘稠液體,。對于富含蛋白,、脂肪或多糖物質(zhì)的組織樣品如肌肉、脂肪組織和植物結(jié)節(jié)部位等,，勻漿后仍會存留有不溶物質(zhì),，可于 4℃ 12,000 x g 離心 10 min，然后吸取上清至一新的離心管中,。
  細胞樣本：
（1）貼壁細胞：吸盡培養(yǎng)液,，每10cm2培養(yǎng)面積（6孔板單孔或35mm平皿）加入1ml Trizol,，用加樣器吹打數(shù)次，以確保細胞完quan裂解,，然后轉(zhuǎn)移至離心管中,。 注：Trizol的使用量應(yīng)由培養(yǎng)皿表面 積決定，而非由細胞數(shù)目決定,。Trizol量不足可能導致提取的RNA中有DNA污染 ,。
（2）懸浮細胞：離心收集細胞，吸盡液體,，每 5-10×106動植物或酵母細胞,，或每 1×107細菌細胞加入 1ml Trizol， 用加樣器吹打,，使其完quan裂解,，然后轉(zhuǎn)移至離心管中。 注：添加 Trizol 前切勿洗滌細胞 ,，以免 RNA 降解,。必要時可以用勻漿器來裂解某些細菌或者酵母細胞 。
2,、液相分離：
（1）裂解產(chǎn)物于室溫放置5min,，使核酸-蛋白復合物完quan分離。（注：此時樣品可在-80℃長期保存,。 ）
（2）每1ml Trizol 加入0.2ml 氯仿,，蓋緊管蓋，劇烈振蕩15s,，室溫放置2-3min,。
（3）4℃ 12,000 x g 離心15min，樣品會分成三層：桔黃色的下層有機相,，中間層和無色的上層水相,。
（4）吸取含總 RNA 的上層水相至一新的離心管中，吸取水相的體積為所用 Trizol 試劑的 60％,。
3,、RNA 回收
（1）按照每 1 ml Trizol 的最初使用量加入 0.5 ml 異丙醇，顛倒數(shù)次混勻,，室溫放置 10 min,。
（2） 4℃ 12,000 x g 離心 10 min，棄除上清,，可見膠狀的 RNA 沉淀,。
（3）按照每 1 ml Trizol 的最初使用量加入 1 ml 75%乙醇，顛倒數(shù)次混勻，洗滌沉淀,。
（4）4℃ 12,000 x g 離心 5 min,，棄除上清。
（5）室溫倒置 5-10 min 晾干或真空抽干（不要使用真空干燥離心機,，以免 RNA 過干,，難以溶解）。
（6）加入適量（如 25ul） DEPC-ddH2O 或 TE 緩沖液,，用加樣器吹打數(shù)次溶解 RNA,。
（7）通過 RNA 電泳以及紫外分光光度計檢測，確定 RNA 的濃度,、純度和完整性,。
（8）所得的 RNA 應(yīng)立即使用或適量分裝后-80℃保存，避免反復凍融,。

4℃避光密閉保存,，保質(zhì)期12個月。

1,、如果需要測量 RNA 的 A260/A280 的比值,，建議使用 RNA 定量緩沖液對樣品稀釋后，進行測量,。
2,、所有離心管，槍頭及相關(guān)溶液都必須無 RNA 酶污染,。耐高溫器物可 180℃烘烤 4 小時以去除RNA 酶,，其它器物去除 RNA 酶可考慮用 0.01%的 DEPC 水浸泡過夜，然后滅菌,，烘干,。溶液需用 DEPC 水配制。加 0.01% DEPC 至重蒸水或 MiliQ 級水中,，處理過夜,，滅菌即成 DEPC 水。
3,、使用凍存的細胞或組織抽提總 RNA 的效果通常比新鮮的細胞或組織差一些。因為在細胞或組織凍融過程中一些細胞或組織內(nèi)的 RNase 會被釋放出來并剪切樣品,。如果不能及時抽 RNA,， 推薦先加入適量 Trizol，并裂解樣品后凍存,。
4,、必須戴一次性手套操作，且盡量不要對著 RNA 樣品呼氣或說話,，以防 RNA 酶污染,。建議戴一次性口罩操作,。
5、避免接觸皮膚或吸入,。為防止濺入眼睛,，請戴防護眼鏡或使用透明保護屏。如皮膚接觸 Trizol,，請立即用大量去垢劑和水沖洗,，如仍有不適，請聽取醫(yī)生意見,。
6,、為了您的自身安全，使用試劑前,，請做好防護,，如穿實驗服，帶手套等,。

總RNA提取試劑（Trizol試劑）