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別名：

B cell stimulatory factor-2, B-cell differentiation factor, BSF-2, BSF2CTL differentiation factor, CDF, HGFHSFIFNB2Hybridoma growth factor, IFN-beta-2, IL6, IL-6, IL-6B-cell stimulatory factor 2, Interferon beta-2, interleukin 6 (interferon, beta 2), interleukin BSF-2, interleukin-6, MGI-2A,人白介素6Elisa試劑盒

檢驗原理：

本試劑盒采用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附檢測技術(shù),。特異性抗人IL-6抗體預(yù)包被在高親和力的酶標板上,。酶標板孔中加入標準品,、待測樣本和生wu素化的檢測抗體,，經(jīng)過孵育,，樣本中存在的IL-6與固相抗體和檢測抗體結(jié)合,，形成免疫復(fù)合物,。洗滌去除未結(jié)合的物質(zhì)后，加入辣根過氧化物酶標記的鏈霉親和素（Streptavidin-HRP）,。洗滌后,，加入顯色底物，避光顯色,。加入終止液終止反應(yīng),，在450nm波長（參考校正波長540nm或570nm）測定吸光度值。

反應(yīng)種屬：Human

檢測范圍：9.38pg/mL-600pg/mL

注意事項：

1. 請在試劑盒有效期內(nèi)使用,。
2. 不同試劑盒及不同批號試劑盒的組分不能混用,。
3. 樣本值若大于標準曲線的最高值，應(yīng)將樣本用稀釋劑（1×）稀釋后重新檢測,；若細胞培養(yǎng)上清液樣本需分布稀釋,，除最后一步用稀釋劑（1×）稀釋外，其它中間稀釋可采用細胞培養(yǎng)基,。
4. 檢測結(jié)果的不同可由多種因素引起,，包括實驗人員的操作、移液器的使用方式,、洗板技術(shù),、反應(yīng)時間或溫度、試劑盒的儲存等,。
5. 試劑盒中的終止液是酸性溶液,，使用時請做好眼鏡、手,、面部及衣服的防護,。
6. 僅供科研使用，不可用于體外診斷,。

使用方法：

需自備試驗器材
1. 酶標儀（可測量450nm檢測波長的吸收值及540nm或570nm校正波長的吸收值）
2. 高精度加液器及一次性吸頭
3. 蒸餾水或去離子水
4. 洗瓶（噴瓶）,、多通道洗板器或自動洗板機
5. 500mL量筒

一、實驗前準備

1. 樣品搜集及儲存
①細胞培養(yǎng)上清：顆粒物應(yīng)通過離心去除,；立刻檢測樣本,。樣本收集后若不及時檢測，建議按一次使用量分裝，凍存于-20℃冰箱內(nèi),，避免反復(fù)凍融,。樣本可能需要用稀釋劑（1×）稀釋。
②血清：使用血清分離管（SST）收集樣本,，樣品室溫放置30分鐘,。離心15分鐘，轉(zhuǎn)速為1000g,。立即取出血清,，并立即檢測。樣本收集后若不及時檢測,，建議按一次使用量分裝,，凍存于≤-20℃冰箱內(nèi)，避免反復(fù)凍融,。樣本可能需要用稀釋劑（1×）稀釋,。
③血漿：使用EDTA、肝素或檸檬酸作為抗凝血劑收集血漿,，在收集后30分鐘內(nèi)離心15分鐘,，轉(zhuǎn)速為1000g，并立即檢測,。樣本收集后若不及時檢測,，建議按一次使用量分裝，凍存于≤-20℃冰箱內(nèi),，避免反復(fù)凍融,。樣本可能需要用稀釋劑（1×）稀釋。

2. 試劑配制（使用前請將所有試劑和樣本放置于室溫,，靜置15min,。建議所有的實驗樣本和標準品做復(fù)孔檢測）
①1×洗滌液配制：試劑盒中的濃縮洗滌液為20×母液，使用前需使用蒸餾水稀釋為1×工作液,。

例：取10mL濃縮洗滌液+190mL蒸餾水定容至200mL,，實際操作時可先計算使用量，再進行配制,。
②1×稀釋用緩沖液配制：試劑盒中的濃縮稀釋用緩沖液為10×母液,，使用前需使用蒸餾水稀釋至1×工作液。

例：取3mL濃縮稀釋用緩沖液+27mL蒸餾水定容至30mL,。實際操作時可先依據(jù)樣本稀釋倍數(shù)，計算所需的稀釋用緩沖液用量,，再進行配制,。
③檢測抗體：將干粉離心至管底，使用110uL稀釋用緩沖液(1×)溶解，室溫靜置5分鐘后得到100×母液,；使用前需稀釋為1×工作液,。按照每孔用量100uL計算所需體積。

例：使用了10個孔,，則取10uL的100倍工作濃度的檢測抗體,，使用稀釋用緩沖液(1×)定容至1mL，得到1mL的1×工作濃度的檢測抗體,。
④SA-HRP：SA-HRP為40×母液,，使用前需使用稀釋緩沖液(1×)稀釋配制成1×工作液，每孔所需量為100uL,。

例：使用了10個孔,，則取25uL的40×母液+975uL稀釋用緩沖液(1×)定容至1mL，得到1mL的1×工作濃度的檢測抗體,。
⑤顯色劑：按每孔100uL,，計算當次試驗所需要用量，取出相應(yīng)體積的顯色劑,，避光,；取出的顯色劑僅供當日使用。
⑥標準品：凍干標準品用稀釋用緩沖液(1×)重溶,，重溶體積1000uL,，得到濃度為600pg/mL標準品母液。輕輕震搖至少5分鐘,，其充分溶解,。每個稀釋管中加入300uL稀釋用緩沖液(1×)。將標準品母液參照下圖做系列稀釋,，每管須充分混勻后再移液到下一管,。沒有稀釋的標準品母液可用作標準曲線最高點（600pg/mL），稀釋用緩沖液(1×)可用作標準曲線零點（0pg/mL）,。

二,、操作步驟
1. 準備好所有需要的試劑和標準品；
2. 從已平衡至室溫的密封袋中取出微孔板,，未用的板條請放回鋁箔袋內(nèi),，重新封口；
3. 向微孔板中加入300uL洗滌液,，靜置浸泡30秒,，棄掉洗液在吸水紙上將微孔板拍干，請立即使用不要讓微孔板干燥,；
4. 分別將不同濃度標準品,，實驗樣本或者質(zhì)控品加入相應(yīng)孔中,，每孔100uL。用封板膠紙封住反應(yīng)孔,，室溫孵育2小時;
5. 將板內(nèi)液體吸去,，使用洗瓶、多通道洗板器或自動洗板機洗板,。每孔加洗滌液300uL,，然后將板內(nèi)洗滌液吸去。重復(fù)操作3次,。每次洗板盡量吸去殘留液體會有助于得到好的實驗結(jié)果,。最后一次洗板結(jié)束，請將板內(nèi)所有液體吸干或?qū)宓怪?，在吸水紙拍干所有殘留液體,；
6. 在每個微孔內(nèi)加入100uL檢測抗體。用封板膠紙封住反應(yīng)孔,，室溫孵育2小時,；
7. 重復(fù)第5步洗板操作；
8. 在每個微孔內(nèi)加入100uLSA-HRP,，室溫孵育20分鐘,。注意避光；
9. 重復(fù)第5步洗板操作,；
10. 在每個微孔內(nèi)加入100uL顯色液,，室溫孵育5-30分鐘，注意避光,；
11. 在每個微孔內(nèi)加入50uL終止液,，孔內(nèi)溶液顏色會從藍色變?yōu)辄S色。如果溶液顏色變?yōu)榫G色或者顏色變化不一致,，請輕拍微孔板,，使溶液混合均勻；
12. 加入終止液后30分鐘內(nèi),，使用酶標儀測量450nm的吸光度值,，設(shè)定570nm或630nm作為校正波長。如果沒有使用雙波長校正,，結(jié)果準確度可能會受影響,；
13. 計算結(jié)果：將每個標準品和樣品的校正吸光度值(OD450-OD540或OD570)、復(fù)孔讀數(shù)取平均值,，然后減去平均零標準品OD值,。使用計算機軟件作四參數(shù)邏輯(4-PL)曲線擬合創(chuàng)建標準曲線。另一種方法是,，可以通過繪制標準品濃度做對數(shù)與相應(yīng)OD值對數(shù)生成曲線,，并通過回歸分析確定最佳擬合線,。這個過程可生成一個足夠使用但不太精確的數(shù)據(jù)擬合。若樣本經(jīng)過稀釋,，計算濃度時應(yīng)乘以稀釋倍數(shù)。

注：提供的標準曲線數(shù)據(jù)僅供參考,，應(yīng)根據(jù)同次試驗所繪標準曲線計算樣本含量,。