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目錄:愛必信(上海)生物科技有限公司>>免疫學(xué)試劑>>互作>> abs955免疫(共)沉淀(IP/CoIP)試劑盒

免疫(共)沉淀(IP/CoIP)試劑盒
  • 免疫(共)沉淀(IP/CoIP)試劑盒
參考價 2625
訂貨量 ≥1KIT
具體成交價以合同協(xié)議為準(zhǔn)
2625
≥1KIT
具體成交價以合同協(xié)議為準(zhǔn)
  • 品牌 absin
  • 型號 abs955
  • 廠商性質(zhì) 生產(chǎn)商
  • 所在地 上海市
屬性

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更新時間:2025-02-07 09:16:29瀏覽次數(shù):5216評價

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供貨周期 現(xiàn)貨 規(guī)格 50T
貨號 abs955 應(yīng)用領(lǐng)域 化工,生物產(chǎn)業(yè),農(nóng)業(yè),制藥,綜合
免疫(共)沉淀(IP/CoIP)試劑盒是基于抗體和蛋白的特異性親和作用,,通過捕獲與蛋白或抗原特異性結(jié)合的抗體,,進(jìn)而從復(fù)雜的樣品中捕獲及富集目標(biāo)蛋白,,同時可以測定與之相互作用的蛋白或其它生物大分子,。

一,、簡介

免疫(共)沉淀(IP/CoIP)試劑盒是基于抗體和蛋白的特異性親和作用,,通過捕獲與蛋白或抗原特異性結(jié)合的抗體,,進(jìn)而從復(fù)雜的樣品中捕獲及富集目標(biāo)蛋白,,同時可以測定與之相互作用的蛋白或其它生物大分子,。


實驗前:為了獲得更好的實驗結(jié)果,,所有的步驟均需要根據(jù)實際情況進(jìn)行優(yōu)化。
例如:根據(jù)細(xì)胞系或被捕獲的抗原后續(xù)用途的不同可選擇更加合適的細(xì)胞裂解條件,。對于沒有細(xì)胞壁結(jié)構(gòu)的哺乳動物細(xì)胞,,可以直接使用去污劑進(jìn)行裂解,但其它細(xì)胞,,則需要一些機(jī)械剪切力輔助,,例如超聲破碎。以下列出的(包括裂解液,、孵育時間,、體積及濃度)是作為初始嘗試的條件建議,zui終的優(yōu)化需要根據(jù)實際情況調(diào)整,。


另外,,細(xì)胞裂解物在進(jìn)行免疫(共)沉淀前,可*行蛋白免疫印跡法檢測,,以此來確定細(xì)胞裂解物里存在目標(biāo)蛋白,。


二、試劑盒組分

試劑名稱體積保存條件
Lysis buffer30ml4 ℃
10*Wash buffer50ml4 ℃
1*SDS 樣品緩沖液1ml4 ℃
Protein A 瓊脂糖珠250ul4 ℃
Protein G 瓊脂糖珠250ul4 ℃

注: Lysis buffer 使用前,,立刻加入 1 mM PMSF(推薦購買abs42025063,,自行配制)。


三,、使用方法


A. 制備細(xì)胞裂解物
1. 吸干培養(yǎng)基,。添加含有調(diào)節(jié)分子的新鮮培養(yǎng)基,使其在預(yù)定的時間內(nèi)對細(xì)胞進(jìn)行處理,。
2. 收集細(xì)胞,,去除培養(yǎng)基后用冰預(yù)冷的 1X PBS 洗滌細(xì)胞一次。
3. 去除 PBS 并在每個細(xì)胞板上 (10 cm) 加入 0.5 ml 冰預(yù)冷的 Lysis buffer,,并在冰上孵育至少 5分鐘,。
4. 從板上刮下細(xì)胞,把提取物轉(zhuǎn)移至微量離心管,。置于冰上,。
5. 在冰上進(jìn)行 3 次超聲破碎,每次 5 秒,。
6. 在 4°C,,在 14,000 x g 條件下,微量離心 10 分鐘,,將上清轉(zhuǎn)移到新管中,。上清液即為細(xì)胞裂解物。如有必要,,裂解物可保存在 –80°C,。
注:細(xì)胞裂解物制備好之后,,可*行蛋白免疫印跡法檢測,以此來確定細(xì)胞裂解物里存在目標(biāo)蛋白,。


B. 免疫沉淀法
細(xì)胞裂解物預(yù)清除(可選步驟)
1. 向 500μl(含總蛋白 200-1000ug) 細(xì)胞裂解物中添加 5μl Protein A 和 5μl Protein G,。
2. 在 4°C 下,旋轉(zhuǎn)孵育 30-60 分鐘,。
3. 4°C 條件下 12000g 離心 1min,保留上清,,待用,。
抗原抗體結(jié)合
1. 在新的離心管內(nèi)加入500μl(含總蛋白200-1000ug)細(xì)胞裂解物(可以是預(yù)清洗后的細(xì)胞裂解物)。
2. 加入目標(biāo)蛋白的單克隆/多克隆抗體(1-5μg),,
3. 同時采用非特異免疫的同源抗體作為對照,。
4. 在 4℃輕柔混合過夜。
免疫復(fù)合物沉淀
1. 抗體孵育過夜后,,加入5μl Protein A和5μl Protein G,。
2. 在4℃溫和地混勻1-3小時或過夜。
3. 12000g離心1min,,保留沉淀,。
4. 使用0.5ml 1*Wash buffer清洗沉淀,12000g離心1min,,保留沉淀,。
5. 重復(fù)第4步,共計清洗3次,。
注:清洗,,去上清的時候需要注意避免吸走填料


C. 用蛋白免疫印跡法進(jìn)行分析
1. 在 20-40 µl 1* SDS 樣品緩沖液中重懸沉淀物。渦旋振蕩,,然后再微量離心 30 秒,。
2. 將樣品加熱至 95–100°C 并持續(xù) 2-5 分鐘,然后在 14,000 x g 下瞬時離心 1 分鐘,。
3. 將樣品 (15-30 µl) 上樣到 SDS-PAGE 凝膠上,。
4. 用蛋白質(zhì)印跡法分析樣品。


四,、試劑盒保存方法

本試劑盒4℃保存,,1年有效。


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