1） 取準備好的蛋白裂解液,，和2*上樣緩沖液等體積混合，混勻后于100度煮10min,，12000rpm離心5min,，取適量體積上樣。
2） 電泳：使用配制好的電泳液,，90V電泳20min,，120V電泳至結束。
3） 轉膜：使用配制好的電轉液,，100V恒壓電轉90min,。
4） 封閉：用1*TBST配制5%的脫脂奶粉/BSA溶液，將膜置于5%的脫脂奶粉/BSA溶液中,，室溫搖床上孵育60min,。
5） 孵育一抗，孵育條件為2-8度搖床上孵育過夜,。
6） 洗滌,，用1*TBST洗3次，每次10min,。
7） 孵育二抗,，孵育條件為室溫搖床上孵育60min。
8） 洗滌,，用1*TBST洗3次,，每次10min。
9） 顯色和曝光,，取顯色A液和B液等體積混合,，將混合后的液體鋪滿整張膜，反應2min,，之后即可進行曝光操作,。

溶液配制
電泳液：取10*電泳液100ml，加入純化水,，定容至1000ml,。
電轉液：取10*電轉液100ml，加入800ml純化水和100ml無水甲醇,。
1*TBST：取10*TBST溶液100ml,，加入純化水，定容至1000ml,。

2-8度保存,有效期6個月,。