預(yù)染marker可提高特異性的識別能力,。在做westen blot時,，用惰性蛋白質(zhì)或非離子去污劑封閉膜上的未結(jié)合位點可以降低抗體的非特異性結(jié)合。封閉劑應(yīng)該封閉所有未結(jié)合位點而不替換膜上的靶蛋白,、不結(jié)合靶蛋白的標委,、也不與抗體或檢測試劑有交叉反應(yīng)。zui常見的封閉劑是BSA,、脫脂奶粉,、酪蛋白、明膠和Tween-20(0.05 - 0.1%)稀溶液。
預(yù)染marker還可以在膜上標記蛋白分子量,，所以吸引了許多實驗室人員購買預(yù)染蛋白標準,。值得注意的是預(yù)染蛋白Marker與染料共價耦聯(lián)，所以在不同的緩沖條件下電泳時遷移特性可能會發(fā)生某些變化,，可能導(dǎo)致一些偏差,，所以不太適合定位蛋白——不過多數(shù)情況下Marker的條帶未必能和我們的目標蛋白*一樣，我們得到的也不過是一種相對Marker指示的參考大小,，zui后都需要Western來定性,，所以如果不是要區(qū)分大小相近的條帶，預(yù)染Marker還是很好用的,，而且也可以和未染色的蛋白標準一起使用,。
預(yù)染marker在電泳過程中或者轉(zhuǎn)膜時可以直接觀察到。預(yù)染蛋白分子量的出現(xiàn)方便了我們的實驗,，這種蛋白分子量標準可以幫助我們在電泳時、電泳后,，以及轉(zhuǎn)膜后監(jiān)測電泳情況和估計遷移率——比如,，已知垂直電泳*分辨區(qū)域大約在膠的2/3處，如果使用預(yù)染Marker就可以預(yù)測目標蛋白進入*分辨區(qū)時停止電泳以得到*分辨效果;如果觀察到Marker電泳異常也可以及時終止電泳;另外在Western Blot轉(zhuǎn)膜以后可以直接觀察蛋白轉(zhuǎn)膜是否*,。
9
立即詢價
您提交后,，專屬客服將第一時間為您服務(wù)